山羊痘强毒冻干试验.pdfVIP

中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 3．3 测定法取试管6支，其中3支各精密加入对照品溶液lml，另3支各精密加入供试品溶液lml，置37℃ -I-0．5℃水浴中反应10分钟。立即精密加入5％三氯醋酸5ml，摇匀，滤过，取续滤液备用，另取试管2支，各 oC 精密加入血红蛋白试液5ml，置374-0．5℃水浴中保温10分钟，再精密加入5％三氯醋酸5ml，其中1支加 供试品溶液lml，另1支加上述盐酸溶液lml，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照， 按分光光度法，在275nm波长处测定吸收度，算出平均值As和A。按下式计算： X 每1含蛋白酶活力单位数=(AGX n)／(A。×G×10×181．19) 式中A——供试品的平均吸收度； As——对照品的平均吸收度； Gs——对照品溶液每lml中含酪氨酸的量，btg； G——供试品的取样量，g； n——供试品的稀释倍数。 在上述条件下，每分钟能催化水解血红蛋白生成1btmol酪氨酸的酶量，为一个蛋白酶活力单位。 这种新方法省时、省力，节约人力财力，很大程度上提高了实验结果的精确性，而且由于其操作方便快捷 对所来的样品可以做到随来随检，不会再影响到生产使用。 山羊痘强毒冻干试验+ 李 平，孔繁梅，张爱民，苏志堂，夏恋志 (中牧股份兰州生物药厂， 甘肃兰州 730046) [摘 要】 该试验利用本室保存的山羊痘强毒组织毒，经羊体复壮繁殖后，采集发痘组织，加入保护剂，选择适当的冻干 曲线进行冻干。冻干品外观良好，经2—4齿龄健康山羊体测定毒价，其ID50=10。～／0．2ml。试验取得了较满意的结果。 [关键词] 山羊痘强毒；采毒；冻干；测毒 为了有利于山羊痘强毒的保存，在本试验中，利用美国VriTisAD2．0型小型冻干柜对山羊痘强毒进行了 冻干试验。现将试验情况报告如下： 1试验材料 1．1毒种山羊痘强毒组织毒，本室保存 1．2山羊2—4齿龄健康山羊 1．3设备美国VriTisAD2．0型冻于机 2方法 2．1 小时后，取上清液在山羊胸腹部皮内多点注射，每点接种0．5毫升。 2．2采毒接种后3天左右开始出现痘疹，开始为红斑，1—2天后形成丘疹，待痘充分肿大，未溃破之时(接 种后约7—8天)进行采毒。具体做法：将羊屠宰后，消毒皮肤，剥离发痘部位羊皮，用剪刀将发痘组织与皮肤 剥离。收集发痘组织剪碎混合后，分装，低温冷冻保存。 +作者简介：李平(1970～)，工程师，生物制品检验及研究 ·‘——207·--—— ofthe10th of Branch,ChineseAssociationofAnimaland Science ProceedingsSymposiumBiological Veterinary 2．3冻干 行10倍稀释，放4℃冰箱静置6—12小时。 2．3．2配制取上清夜与保护剂以1：1比例混合均匀后，分装安剖瓶，1毫升／支。保护剂分为两组，一组为 5％蔗糖牛奶保护剂，一组为水解乳蛋白保护剂。 合适的冻干曲线进行冻干。 2．4检验 2．4．1物理性状及无菌检验按《兽用生物制品规程》要求进行检验。 4齿龄健康山羊)，每滴度接种2只山羊，每只山羊0．2毫升，观察10天。 3 结果 以水解乳蛋白为保护剂的一组样品冻干后干损严重，废弃。以5％蔗糖牛奶为保护剂的样品冻干后外观呈 意的结果。 4讨论 4．1样品预冻时间与样品的装量、容器品种有关，原则是使样品冻实即可。在使用本实验室冻干柜进行冻 干时，如果直接把样品放入冻干机中进行预冻，冻干结束后，冻干品外观较易出现结晶现象，而在一30℃至一 40℃冰柜中进行预冻，则较好地避免了这一现象。 4．2羊痘发痘部位皮肤中也含有大量的病毒，但在本次试验中采毒时只收集了皮肤下的发痘组织，没有要 皮肤，这是出于减少污染的考虑。 4．3在本次试验中，冻干品毒价不是很高，这应该与样品含毒量较低有关(每支冻于毒中组织毒的实际含量 为0．05克)。增大含毒量应该会提高病毒滴度，应该会更