1.1DNA重组技术的基本工具 课件（人教版选修三）.pptVIP

基因工程 治疗糖尿病特效药—— 问题探讨： 　　　苏云金杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想需要做哪些关键工作？ 随堂练习： 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 2. （多选）有关基因工程的叙述中，错误的是 A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体 C C C G G G G G G C C C 中轴线 SmaI限制酶的切割： C C C G G G G G G C C C 平末端 平末端 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 产生黏性末端或平末端。 ⑥限制酶的作用结果： 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。 想一想限制酶所识别的序列有什么特点？ 寻根问底 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是是什么吗？ 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 ①作用: ②作用原理： 催化磷酸二酯键形成 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来. “分子手术刀”——限制性核酸内切酶 “分子手术刀”——限制性核酸内切酶 (二)“分子缝合针”——DNA连接酶 ③类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 相同点 区别2 区别1 DNA连接酶 DNA聚合酶 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 将外源基因送入受体细胞。 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” ①载体的作用： 质粒 λ噬菌体的衍生物 动植物病毒等 ②载体的种类： 质粒： 裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” ③作为载体的必要条件： 有切割位点——供外源DNA片段(基因)插入。 能自我复制—— 有遗传标记基因——供重组DNA的鉴定和选择。 载体DNA必需是安全的——不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 载体DNA分子大小应适合——以便提取和在体外进行操作，太大太小都不便操作。 质粒： 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别。 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 最常用的质粒——大肠杆菌的质粒 试分析其作为载体的优点？ 2 7 4 8 3 6 1 5 双基练习： 一、基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外____和____等技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出符合人们的需要的新的____和____.又叫做DNA的重组技术 . 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶-----”分子手术刀”