海藻糖二十碳五烯酸酯的合成与表面性能(翻译)预案.doc

海藻糖二十碳五烯酸酯的合成与表面性能 摘要：海藻糖二十碳五烯酸酯是以二十碳五烯酸乙酯和海藻糖为底物，利用微生物脂肪酶在叔丁醇中通过脂基转换合成的。反相高效液相色谱法加上二极管阵列检测和电喷雾质谱（RPHPLC-DAD-ESI-MS）分析表明，该反应混合物中存在单酯和二酯。采用硅胶柱色谱法预处理反应混合物，然后再用高效液相色谱法洗脱海藻糖二十碳五烯酸酯，进一步纯化。通过ESI-MS和核磁共振（NMR）对该化合物的结构进行表征。证实，单酯为 6-O-海藻糖二十碳五烯酸单酯。接着，我们将海藻糖二十碳五烯酸酯的表面性能进行了研究。结果显示表面张力，γcmc 和△Gomic随着温度的升高降低，但是每个分子占据的面积略有增加。 关键词：海藻糖二十碳五烯酸酯、酯基转移反应、分离纯化、结构鉴定、表面特性 介绍 膳食长链脂肪酸的二十碳五烯酸（EPA，20：5n- 3）属于n-3不饱和脂肪酸（多不饱和脂肪酸），其具有多种生物活性，并有生理功能[1,2]。一些研究表明，它可用于预防和治疗心血管疾病[3-5]。Stulnig[6]和Li[7]报道表明EPA可以从膜筏置换酰基化蛋白质，从而调节免疫应答。EPA也可以在各种炎症的治疗临床应用作为辅助免疫抑制剂。西田[8]提供的研究表明，EPA可能对H2O2氧化损伤起到内源性保护作用。Mori [9]也显示EPA可降低体内氧化应激。哈德曼[10]发现，EPA可以增加抗癌药物的有效性。巴布科克[11]报道，EPA补充剂可以促进保持体重和抑制肿瘤发展。此外，一些文章也显示出n- 3脂肪酸可以对人类癌症治疗有帮助[12-14]。EPA也作为预防医学治疗的推荐措施。乙基二十碳五烯酸的酯已经被用于在动脉硬化性闭塞症，高血脂的治疗[15]。 然而，EPA是不稳定的，很容易在暴露于氧或活性氧中被氧化成脂质自由基或脂质过氧自由基。虽然，在PUFA的主体相氧化已经研究充分，也有一些研究表明该多不饱和脂肪酸的在主体相的氧化稳定性从水性体系中[16,17]显著不同，Endo等人的报道称甘油三酯的氧化含有二十碳五烯酸和二十二碳六酸取决于氧化系统和甘油三酯结构。Chaiyasit等人认为界面膜属性的改变与表面活性剂的属性有关，同时表面活性剂性能影响油包水乳液液滴的氧化。为了更好地理解多不饱和脂肪酸在具有最小影响因素的水溶液中的氧化，我们使用胶束作为模型系统。我们所用的两性的EPA酯是具有表面活性的，并且可以在水溶液中作为一个起作用表面活性剂。 海藻糖是在自然界中很稳定寡糖，是一个非还原性糖，海藻糖具有热稳定性及不发生美拉德反应。根据Kohya[20]和Okabe [21]报道，海藻糖有抗肿瘤作用。因此，我们使用海藻糖作为羟基提供者。 Cerdan等[22]报告了从多不饱和脂肪酸浓缩甘油鱼肝油经酯化生产高度EPA-和富含DHA的甘油三酯。Shimada等人[23]认为可通过酶法催化二十二碳六，二十碳五，花生四烯酸，和c-亚麻酸的合成固醇酯。Yamamura [24]报道的方法以纯化十二碳六烯酸乙酯和二十二碳五烯酸乙酯。然而，很少有数据提供两性海藻糖的分离和纯化酯EPA的。在这里，我们采用高效液相色谱法结合硅胶柱色谱法纯化海藻糖二十碳五烯酸酯。此外，我们探讨了海藻糖二十碳五烯酸酯在水溶液的表面性质。 材料和方法 材料： Novo435（南极假丝酵母脂肪酶B固定在一大孔聚丙烯树脂）购自购的Novozyme（Bagsvaerd，丹麦）。海藻糖二水合物（纯度98％）是从ST公司（上海，中国）购得。EPA乙酯（纯度70％）由无锡市迅达海洋生物制品检定所购得（中国，无锡）。高效液相色谱法级甲醇是从江苏Hanbon科技有限公司获得（淮安，中国）。分析纯其它试剂均为从中国医药集团（上海，中国）购得。海藻糖二十碳五烯酸酯在间歇式反应器合成。 海藻糖（0.75克，在干燥器中预干燥）和EPA乙酯酯（1.96克）混合，用150毫升叔丁醇。该缩合反应，从加入脂肪酶（0.75克）开始。该棕色反应容器充满惰性氮塞住后固定在定轨摇床上，其装有一个连续振荡温控器（上海景洪实验室仪器有限公司有限公司，中国上海）设定在50℃和以150rpm转速工作48h。溶剂在使用前用脱水分子筛（4埃）过滤至少24h。 海藻糖二十碳五烯酸酯纯化： 使用RPHPLCDAD-ESI-MS的反应混合物进行分析，然后在硅胶柱进行预分离纯化，再使用HPLC。分析该反应混合物的RPHPLC-DAD-ESI-MS，由Waters ZMD平台4000系统组成。该系统包括了Micromass ZMD质谱仪和配备有沃特斯996二极管阵列检测器（沃特斯公司，米尔福德，MA，USA）的Waters2690 HPLC构成。数据用是用MassLynx处理软件4.0版本（Micromass，沃特斯的子公司，富康，MA