Cripto-1和p-STAT3蛋白在胃癌.ppt

Cripto-1和p-STAT3蛋白表达与胃癌发生和转移的关系及意义 张建国 赵晶 辛彦 中国医科大学附属第一医院 肿瘤研究所 Cripto-1(CR-1) 为表皮生长因子-CFC(Epidermal Growth Factor-Cripto-1/FRL-1/Cryptic)家族成员，具有调节细胞分化和早期胚胎发育的功能。 CR-1也是一个重要的癌基因生长因子，与人类多种恶性肿瘤的发生和转移密切相关。 目前研究表明CR-1主要通过激活丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 与 PI3K/AKT信号通路及阻遏活化素 （activin）、TGF-β信号的抑癌效应发挥其癌基因功能，如促进肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤血管形成等。 STAT3是JAK-STAT信号途径中的一种关键性转录因子，该通路受细胞因子与生长因子的刺激而活化，并通过调控其下游靶基因来促进细胞异常增殖和恶性转化，进而参与肿瘤的发生发展。 本研究通过免疫组化及Western blot方法检测CR-1与p-STAT3蛋白在正常胃黏膜、癌前病变及胃癌组织中的表达，分析并探讨二者在胃癌发生发展过程中的作用及意义。 材料与方法 1、标本收集 另取32例新鲜原发胃癌及其配对远癌正常胃黏膜组织标本，进行免疫蛋白印迹实验 95 40 48 25 178 178例胃癌临床病理资料： WHO组织学分型 Borrmann分型 男性121 例，女性57例 140 4 22 12 65 74 19 2 3 6 2、实验试剂 鼠抗人CR-1单克隆抗体（RD公司） 1：80（免疫组化）,1：300（Western blot） 兔抗人p-STAT3单克隆抗体（SAB公司） 1：25（免疫组化）,1：300（Western blot） 鼠抗人β-Actin单克隆抗体（Santa Cruz） 1:1000 PV-9000 免疫组化检测试剂盒、DAB 显色试剂盒（北京中杉金桥公司） Wesetern blot二抗（Santa Cruz） 3、免疫组化及结果判定 采用PV-9000二步法进行免疫组化染色 结果判定：CR-1蛋白定位于细胞浆，p-STAT3定位于细胞浆和细胞核，二者均以出现清晰棕黄色颗粒为阳性细胞。 染色强度(A) 染色阳性细胞(B) 0分 无特异性染色 5% 1分 浅黄色 5~25% 2分 棕黄色 26~50% 3分 棕褐色 51~75% 4分 75% A B 0分 1分 2分 3分 0分 (-) (-) (-) (-) 1分 (-) (+) (+) (+) 2分 (-) (+) (+) (++) 3分 (-) (+) (++) (+++) 4分 (-) (+) (++) (+++) 结果判定A×B ：0分为阴性(-)；1~4分为弱阳性 (+)；5~8分为中度阳性(++)；9~12分为强阳性(+++) 4、蛋白免疫印迹与结果判定 蛋白免疫印迹实验 结果判定：对成像结果进行扫描，并使用QUANTITY ONE 4.6采集数据。用目的蛋白CR-1及p-STAT3分 别与β-actin的比值作为目的蛋白相对表达水平 5、统计学分析 结果采用SPSS13.0统计学软件分析 （蛋白表达阳性率的比较应用χ2检验；相关性分析应用Kendall’s tau-b等级相关；蛋白免疫印迹图像灰度值用独立样本t检验） P0.05视为差异有统计学意义 实验结果 CR-1在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化 生、异型增生及胃癌中的表达（表1，图1） p-STAT3在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮 化生、异型增生及胃癌中的表达（表2，图2） 免疫蛋白印迹法检测CR-1与p-STAT3在胃癌及正常 胃黏膜中的表达(表3、图3） 胃癌组织中CR-1与p-STAT3表达与胃癌临床病理特征的 关系（表4、5，图4） 胃癌组织中CR-1与p-STAT3蛋白表达的相关性分析 (表6） 43.2% 65.0% 83.3% 80.0% 71.3% 表1，CR-1在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌中的表达 　 组别 　 例数 CR-1 表达 　 +~+++ (%) 　 χ2 　 P - + ++ +++ 正常胃黏膜 117 61 31 19 6 47.9 5.575/19.226 0.018a /0.001b 慢性萎缩性胃炎 42 13 14 11 4 69.0 2.729/0.957 0.099c/0.328d 肠上皮化生 54 9 22 19 4 83.3 2.675 0.102e 异型增生 25 5 12 7 1 80.0 8.552/