柯萨奇16型（CA16）检测试剂盒（ELISA）说明书20121019(修改).doc

柯萨奇16型（CA16）检测试剂盒（ELISA）说明书 【试剂盒名称】 通用名：（酶联免疫法） 英文名： ELISA Detection Kit Cat：17-0018 【用途】 检测样品中含量。 【试验原理】 本品采用双抗体夹心法原理，用抗抗包被酶联反应板，加入待检标本反应后抗单克隆抗体，通过TMB显色指示样品中含量。 【提供的材料与试剂】 1. 抗抗包被酶联板孔×条 2. 检测抗体(100×)，120ul×1管 17-0018b 3. 抗鼠Fc-HRP(100×) 120ul×1管 17-0018c 4. BSA 3g/袋×1袋 SI00277 5. 20×洗液 50ml×1瓶 SI00190 6. 底物显色A，7ml×1瓶 SI00192 7. 底物显色B，7ml×1瓶 SI00193 8. 终止液7ml×1瓶 SI00194 9. 封板膜 3张 10. 说明书1份 【贮藏】28℃，避光保存，有效期6个月 【操作步骤】 将试剂移到室温（1825℃）平衡。×洗涤液：取瓶20×洗液，用水稀释至1000ml，混匀后备用。×洗涤液中，充分混匀备用。 ③.检测抗体工作液（工作浓度为1ug/ml）：取所需检测抗体加入到适量②配制的稀释液中，充分混匀备用。 ④.酶结合物工作液（工作浓度为1:200）：取所需酶结合物×洗涤液，充分混匀备用。 3.加样:将抗包被酶联板从密封袋中取出，将待检样品用稀释液稀释后，每孔加样品100μl，同时设阴性对照37℃温育分钟。 弃去各孔内液体，×洗涤液注满微孔，静置30秒，拍干.加检测抗体：每孔加100μl，37℃温育分钟。 弃去各孔内液体，×洗涤液注满微孔，静置30秒，拍干.加酶:每孔加100μl，37℃温育分钟。 .洗涤: 弃去各孔内液体，×洗涤液注满微孔，静置30秒，拍干.显色:每孔加显色A 50μl，显色B 50μl，轻振荡混匀后置暗处显色~10分钟 11.测定: 每孔加终止液50μl。选择酶标仪波长450nm，参考波长630nm，测定各孔值。 【】 标准品浓度X取对数(LogX) 复孔测定OD值 OD值均值 扣除0标准 OD均值取对数(LogOD） 100 2.000 1.976 2.195 1.962 2.044 1.921 0.284 50 1.699 0.989 0.824 1.139 0.984 0.861 -0.065 25 1.398 0.610 0.687 0.633 0.643 0.520 -0.284 12.5 1.097 0.292 0.288 0.420 0.333 0.210 -0.677 6.25 0.796 0.217 0.236 0.244 0.232 0.109 -0.961 0 / 0.116 0.115 0.138 0.123 0 / 2. 以标准曲线浓度6.25～100ng/ml对应的对数值,与对应OD值的对数进行线性拟合，得到标准曲线方程（如下图所示）。 Log-Log Fit: Log(y)=A+B*Log(x) A=－1.781，B=1.030, R2 = 0.9847 3.计算测定样品浓度 样品编号 OD值 OD均值 扣除0标准 取对数(y) 代入上述线性方程计算x值 计算得到待测样品浓度（=10x,单位：ng/ml） 样品1 0.456 0.4595 0.337 -0.473 1.270 18.616 0.463 样品2 0.769 0.758 0.635 -0.197 1.538 34.486 0.747 样品3 1.065 1.04 0.917 -0.038 1.693 49.271 1.015 【产品性能指标】 精密度：CV（%）不高于15%（n=10