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现代食品分离技术 第二章 沉淀分离技术 知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金属离子沉淀法。 重点：上述几种沉淀方法的概念、原理及其适用范围；盐析法的影响因素对沉淀效果的影响，并能根据实际情况予以灵活应用和选择。 难点：常用沉淀方法的灵活运用 第一节 沉淀分离的目的及其方法 1.沉淀定义：溶液中的溶质在适当条件下由液相变成固相而析出的过程。 2.沉淀目的：浓缩和去杂，液相变固相 3.应用要求：选择性，目标成分的活性和化学结构的不破坏性，无有害残留 4.沉淀分类：无机沉淀剂、有机沉淀剂、非离子多聚体沉淀剂、等电点沉淀、共沉淀分离、变性沉淀分离 第二节 无机沉淀剂沉淀分离法 很多金属盐类的溶解性比较低，如硫酸盐、碳酸盐、草酸盐。所以，当添加适当的无机沉淀剂形成上述各种化合物时，便会形成沉淀。 第二节 无机沉淀剂沉淀分离法 一、金属盐类沉淀分离法 利用金属离子与酸根在形成盐类时溶解度低而得以沉淀分离。 柠檬酸工业中钙盐法 第一步 钙盐中和 2C6H8O7.H2O+CaCO3 → Ca3(C6H5O7)2.4H20+CO2+H2O 第二步 酸解 Ca3(C6H5O7)2.4H20+3H2SO4+H2O → 2C6H8O7.H2O+3CaSO4.H2O 谷氨酸能与Zn2+、 Ca2+、 Cu2+等金属离子作用生成谷氨酸盐沉淀。 此类沉淀影响因素主要温度和pH值 常有共沉淀作用和吸附作用发生，因此分离作用不是很理想，一般用作粗分离。 二、盐析 应用：蛋白质和酶的粗提纯 特点：成本低、操作简单、安全、对生物活性成分破坏作用小。 主要内容： 1、原理 盐溶 盐析 2、盐的选择 3、影响盐析效果的因素 4、脱盐处理 1.盐溶与盐析的原理 （1） 盐溶 在低浓度下，蛋白质和酶类的溶解度随盐浓度的提高而增大，称为盐溶。主要是中性盐离子对蛋白质分子表面活性基团及水活度的影响。 a 无机盐离子在蛋白质表面上吸附，使颗粒带相同电荷而相互排斥； b 无机盐离子增加了蛋白质的亲水性，改善了与水膜的结合，增加了蛋白质分子与溶剂分子相互作用，使蛋白质浓度增加。 （2）盐析原理 ①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降； ②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降； ③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低。 盐析原理图 蛋白质的溶解度与溶液中盐的离子强度之间的关系（Cohn表达式） lg(S/S0) = -KsI lgS = lgS0 -KsI S0：蛋白质在纯水中的溶解度； S：蛋白质在离子强度为I的溶液中的溶解度； Ks：盐析常数； I：离子强度 注： M表示溶液中各种离子的物质量浓度，z为各种离子的价数。 当温度和pH值一定时，对于某一溶质来说，其S0是一个常数，即lgS0=β β的大小取决于溶质的性质，与温度和pH有关。 β分段盐析法：保持溶液的离子强度不变，改变溶液的pH和温度，使不同的溶质在不同的pH和温度下有最大的析出. Ks取决于盐的性质，并且与离子的价数、平均半径有关。高价阴离子有较高的Ks ，高价阳离子有较低的Ks 。 Ks越大，盐析效果越好。 Ks分段盐析法：在一定的pH和温度下，改变盐离子的离子强度I值，使不同的溶质在不同的离子强度下有最大的析出。 2、盐析分离法中盐的选择 蛋白质的盐析中，以硫酸铵、硫酸钠应用最广。 （1）硫酸铵的特点： 温度系数小：温度变化引起溶液性质的变化不大； 溶解度大； 对蛋白质变性影响小； 价格低。 但缓冲能力小； 含氮，影响蛋白质含量的测定。 （2）无机盐种类的影响 3、影响盐析效果的因素 （1）蛋白质浓度： 2.5~3% 蛋白质浓度高，盐用量少，但是共沉淀导致选择性下降。 （2）离子强度的影响：不同类型的蛋白质，盐析时所要求的离子强度各有不同。逐渐增加离子强度，分步盐析。可以体现出对蛋白质的选择性。各种蛋白质的Ks相差越大，效果越好。 （3）不同离子类型对盐析效果的影响 离子半径小、带较高电荷的离子盐析效果好！ 磷酸钾＞硫酸钠＞硫酸铵＞柠檬酸钠 ＞硫酸镁 （4）pH值的影响 一般在等电点下进行 （5）温度的影响 通常在常温下操作，对于敏感的酶类，在低温下操作。 盐析操作 4、脱盐处理 透析法：半透膜，具有让小分子和水扩散而不断通过，直到膜内外浓度达到平衡。 电渗析法 葡萄糖凝胶过滤法 5.硫酸铵饱和度的调整方法 1.添加硫酸铵固体 在不宜增加溶液体积时应用，可能导致局部浓度过高 2.添加饱和硫酸铵溶液 V-需加入的饱和硫酸氨溶液的体积； V0-待盐析溶液的体积 S1-原来溶液的饱和度 S