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Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 重组DNA技术操作的主要步骤 载体 质粒 噬菌体 病毒 目的基因（外源基因） 基因组DNA cDNA 人工合成 PCR产物 限制酶消化 开环载体DNA 目的基因 连接酶 重组体 转化 体外包装，转染 带重组体的宿主 筛选 表型筛选 酶切电泳鉴定 菌落原位杂交 目 录 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 第四节 基因工程的应用 1. 生命科学基础理论研究中的应用 2. 动植物基因工程 3. 微生物基因工程和发酵工业 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 在分子生物学领域，利用基因工程技术对大肠杆菌 体内的基因50%以上已被定位，其DNA序列已被测 出，基因表达调控关系也基本清楚。 在真核生物中，利用基因工程的理论和技术已发现 上百种癌基因和209余种抗癌基因，它们分别是细胞 增殖调控的正负信号。 在发育生物学中精细胞的分化及受精过程所发生的 变化，基因表达的发育调控的研究与基因工程技术 的应用是密不可分的。 第四节 基因工程的应用一、生命科学基础理论研究中的应用 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 转基因动物与蛋白制药的生产 转基因动物与动物改良 转基因动物与人类疾病治疗 转基因动物与基础生物学研究 转基因植物 第四节 基因工程的应用二、动植物基因工程 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 转基因动物与蛋白制药的生产 转基因动物可以用来代替发酵缶生产一些珍贵 的蛋白质。它的原理是使外来基因在动物乳腺 中表达，从乳液中提取所要的蛋白质。 英国的药用蛋白公司用这种方法将转基因绵羊 来试行生产人类抗胰蛋白酶因子，在每升羊奶 中可取得35克这种蛋白质。 第四节 基因工程的应用二、动植物基因工程 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 转基因动物与动物改良 第四节 基因工程的应用二、动植物基因工程 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 转基因动物与基础生物学研究 在佛罗里达州杰克逊维尔的MAYO诊所研究员 成功的繁殖出了大脑患有神经纤维缠结，具有 人类老年性痴呆症病理特征的小鼠。 这只小鼠 模拟了人类神经纤维缠结的形成过程，为研究 者希望攻克预防、治疗老年性痴呆和其他痴呆 症提供了重要的基础。 第四节 基因工程的应用二、动植物基因工程 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 英国伦敦的一个研究小组把一个来自Y染色体的 Sry基因注入基因型为雌性的鼠的胚胎内，结果 令人吃惊。这些本来应该发育成雌鼠的胚胎最 后竟都长成了雄性鼠。这个结果表明，Sry基因 是决定雄性性别的基因。科学家猜测，这个基 因很可能在人类中也起着同样的作用。 转基因动物与基础生物学研究 第四节 基因工程的应用二、动植物基因工程 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 转基因植物 第四节 基因工程的应用二、动植物基因工程 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 我国已有人干扰素、人白介素 2、人集落刺激因子、重组人乙型肝炎疫苗、基因工程幼畜腹泻疫苗等多种基因工程药物和疫苗进入生产或临床试用 世界上还有几百种基因工程药物及其它基因工程产品在研制中，成为当今农业和医药业发展的重要方向，将对医学和工农业发展作出新贡献 第四节 基因工程的应用三、微生物基因工程和发酵工业 * 限制酶主要来自于细菌，商品化的限制酶现有100多种，其切割序列明确。 * * 左下角处有超级链接到配伍末端 * 逆转录酶以单链RNA为模板合成DNA，合成时需要4 种dNTP及引物，合成方向为5’→3’ ，有3’→5’RNA外切酶活性（又称RNA酶H活性）， 无3’ → 5’ DNA外切酶活性。广泛用于以mRNA为模板合成cDNA，构建cDNA文库。 * 所有克隆的目的DNA片段没有明显的遗传标志，且外源DNA片段导入宿主细胞后，无自主复制能力，无法进行扩增。 * 构建基因组文库常用?噬菌体和粘性质粒载体，构建cDNA文库和克隆较小DNA片段常用pUC系列等质粒，M13噬菌体则用于克隆一