抗奶牛γ干扰素特异性单克隆抗体的研制及其特性.pdf

第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会2006年会议论文集 图9鸡抗重组PBV220-IFN大肠杆菌包涵体抗体的免疫荧光鉴定 At阳性反应结果 B：阴性对照 3讨论 生产重组牛Y—lFN的研究也开始兴起，先后在大肠杆菌14】、酵母p，6】、牛I型疱疹病毒载体 VJ、昆虫细胞I州中表达出了BovlFN--7，并对其免疫学和生物学活性进行了一些研列引。IFN 一1，不仅能单独作为生物制剂应用于一些疾病的防治，而且可作为免疫佐剂，增强疫苗的免 疫效果，还能与一些病原微生物的保护性抗原基因共表达，从而加强和改善疫苗的免疫效果。 本研究扩增得到的牛干扰素—呷基因与GenBank上牛干扰素—丫基因进行对比分析，该 序列与GenBank上发表的基因序列完全一致，氨基酸同源性为100％，以上分析表明本试验 已经成功扩增了牛干扰釉基因。 本实验成功扩增了牛干扰素—，r基因，经过免疫荧光鉴定，证明通过表达提取的包涵体 可以诱导鸡产生特异性抗鸡IFN吖的抗体，表明了重组PBV220．IFN-7大肠杆菌通过温 度诱导产生了IFN-T。不仅为IFN—Y在提高牛免疫防御功能、免疫抗病力和疫苗免疫保 护反应中的作用的研究奠定了基础，而且对深入了解牛干扰素—丫在牛免疫系统及免疫应答 中的作用，具有重要的理论意义，同时还具有重要的现实意义。 参考文献略 抗奶牛卜干扰素特异性单克隆抗体的研制及其特性★ 李瑞芳， 秦爱建， 许金俊 摘 (SDS)后，切取融合蛋白条带作为抗原免疫BALB／c小鼠．利用杂交瘤技术研制抗牛吖干扰素 间接免疫荧光(IFA)方法进行鉴定，筛选出2株分泌特异性抗BovlFN-Y的杂交蔫细胞株，分别命名为 不能与GsT和鸡lFN吖反应，说明单抗具有很好的特异性．进一步研究表明单抗能中和BovlFN．ff对水泡 性t：／炎病毒(VsV)对牛肾细胞的致病变作用．这些单抗可用于奶牛结核病的监测和防治． 关键词：奶牛；7-干扰素；单克隆抗体 牛结核病(Bovine bovis)引起的一 Tuberculosis)是由牛结核分枝杆菌(Mycobactedum 种人兽共患的慢性传染病。患结核病的牛咳嗽时，可将带茵飞沫排于空气中，健康人和牛吸 ※基金项目：江苏省“333一工程人才培养基金(2002)资助 通讯作者：…秦爱建aijianSyzu．edu．cn 作者单位：扬州大学兽医学院，扬州225009 ．·589． 牛羊马传染病 入，即可引起感染。在大自然环境中放牧野生牛结核病，患病率1％--5％。而圈养的奶 牛和鹿由于牛棚通风差，互相密切接触，结核感染率可高达25％50％。若不严加管理， 牛结核流行和传播也很迅速。牛结核的控制关系到世界的食品安全和人类健康。 目前结核的诊断和检疫的方法主要是病原分离鉴定和结核菌素试验。尽管传统的结核菌 素试验得到了广泛的应用，但已证实该方法存在一些问题。一些文献报道，牛单一结核菌素 WoodPR等发现SIDT的敏感性为65．6％[5】， 试验(SIDT)方法的敏感性有时不高【4】。 RitaccoV等报道对牛结核病的ELISA 73．6％【6】。国外，目前建立了一种新颖的用于诊断牛 结核病的牛Y干扰素测定技术【7．9】。该方法通过全血培养、牛牛分支杆菌抗原PPD作为刺 激物， 利用牛7干扰素特异性抗体检测全血培养中释放出的丫干扰素，从而对牛结核病进 行诊断。该方法的敏感性为93。60／o，比结核菌素试验65．60／o的灵敏性高出许多。这一技术可 能成为2l世纪诊断牛结核病的最新诊断试验方法。而这一试验的最关键试剂是抗丫干扰素 特异性抗体，因此，本研究的目的是研制重组牛Y干扰素的单克隆抗体，以期利用这些单克 隆抗体开发一种对牛Y干扰素敏感的酶联免疫试验(ELISA)，为结核病的快速检测提供条 件。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1质粒、细菌与病毒 rBacmid-BovlFN-y为本实