新型旋转壁式生物反应器内三维组织工程骨的构建.pdf

I019 新型旋转壁式生物反应器内三维组织工程骨的构建? 1 1,△ 1 1 1 1 2 宋克东 刘天庆 李香琴 葛丹 孙相玉 马学虎 崔占峰 1 (大连理工大学干细胞与组织工程研究室, 大连116024) 2 (牛津大学工程科学系,牛津英国) 摘 要 目的：利用SD大鼠成骨细胞作为种子细胞整合到支架材料上，在新型旋转壁式生物反 应器内进行组织工程骨的三维构建。方法：利用微载体悬浮培养法将成骨细胞在旋转壁式生物反 应器内进行大规模扩增，并检测细胞的组织形态和生物功能。然后以此作为种子细胞，分别以 6 6 2×10 cells/ml和 1×10 cells/ml两种密度接种到支架材料上，于旋转壁式生物反应器(RWVB) 内进行 三维组织工程骨的构建。并将所构建的骨组织分别进行倒置显微镜(Inverted Microscope)、扫描电 镜(SEM)、碱性磷酸酶(ALP)、矿化结构和AO/EB荧光染色等生物学性能检测，以及对培养过程 的营养物质代谢情况进行监控和分析。结果：在RWVB 中培养的以两种密度接种所构建出的骨组 织生长良好，分泌大量胶原纤维，并有矿化基质和新骨样组织形成。 结论：通过RWVB 内部流 体对流所产生的应力刺激，能够提高成骨细胞碱性磷酸酶的活性表达，并能加速矿化结节的形成， 从而完成成骨细胞的快速增殖与分化以及工程化组织的三维构建。本研究表明骨组织工程化的现 实可行性，并为临床上解决骨缺损建立了一种多学科交叉的方法。 关键词 组织工程骨 成骨细胞 生物反应器 支架材料 细胞培养 中图分类号 R782 THREE-DIMENDIONAL FABRICATION OF ENGINEERED BONE IN ROTATING WALL VESSEL(RWV) BIOREACTOR 1 1,△ 1 1 1 1 SONG Kedong , LIU Tianqing , LI Xiangqin , SUN Xiangyu , GE Dan , MA Xuehu , CUI 2 Zhanfeng 1(Stem Cell and Tissue Engineering Laboratory, Dalian University of Technology, Dalian, 116024)2 (Department of Engineering Science, Oxford University, Parks Road, Oxford OX1 3PJ, U.K) Abstract Objective: The osteoblasts isolated from the cranium of newborn SD rat of 3 day old were inoculated onto the scaffolds to investigate the three-dimensional fabrication of engineered bone in rotating wall vessel bioreactor (RWVB). Methods: The osteoblasts were expanded in large-scale by microcarrier suspension culture in RWVB, then the biological functions of the cells 6 6 were detected by his