肌糖原的酵解-副本分解.ppt

 肌糖原的酵解  ——实验研讨 01 实验内容 肌肉糜的糖酵解 乳酸的测定 02 结果和分析 03 课后研讨题 04 心得与体会 PPT主要内容提要： 实验内容——肌肉糜的糖酵解 （1）取4支试管编号，加入新鲜肌肉糜0.5g。1、2管为样品管，3、4管为对照管。向3、4对照管内加入15%的偏磷酸溶液3mL，用玻璃棒将肌肉碎块打散搅匀，以沉淀蛋白质、终止酶的反应。 （2）4支试管中分别加入3mLpH 7.4的磷酸缓冲液和1mL0.5%淀粉，用玻璃棒充分搅匀。再加入1mL/ 管液体石蜡，以隔绝空气。将4支试管同时放入37 ℃ 恒温水浴中保温1小时。 （3）取出试管，立即向1、2号试管内加入15%偏磷酸液3mL并混匀。将各试管内容物分别过滤，弃去沉淀。 （4）量取每个样品的滤液4mL,分别加入已编号的试管中，然后每管内加入饱和的硫酸铜液1mL，混匀，再加入0.4g氢氧化钙粉末，用玻璃棒充分搅匀，放置30min，并不时搅动内容物，使糖沉淀完全。将每个样品分别过滤 ，弃去沉淀。 实验内容——乳酸的测定 （1）取4支洁净、干燥的试管，编号。各加入浓硫酸1.5mL和3滴对羟基联苯试剂（每滴大小要一致），混匀后放入冰浴中冷却。 （2）将每个样品的滤液0.25mL逐滴加入到已冷却的上述混合液中，随加随摇动冰浴中的试管，注意冷却（注意加对羟基联苯和滤液时避免滴到试管壁上） （3）将各试管混合均匀，放入沸腾的水浴中待显色后即取出，比较和记录各管溶液的颜色深浅，并加以解释。 结果和分析 实验结果： 左一（样品1）：呈现紫罗兰色，颜色较浅 左二（样品2）： 呈现紫罗兰色，颜色较深 左三（空白1）：呈现深黄色 左四（空白2）：呈现浅黄色 结果分析： 左一（样品1）：乳酸可以与硫酸共热便成乙醛，后者再与对羟基联苯反应生成紫罗兰色物质,可能因淀粉或蛋白质处理不彻底，影响了其显色效果。 左二（样品2）：乳酸可以与硫酸共热便成乙醛，后者再与对羟基联苯反应生成紫罗兰色物质。 左三（空白1）：在加入三氯乙酸后，没有完全震荡，肌肉糜中的酶没有与三氯乙酸完全反应，导致其后加入的淀粉发生酵解反应，最终生成少量乙醛与显色液发生反应；另外在肌肉糜中本身含有糖类，在未加入三氯乙酸之前反映了一部分，生成部分乳酸。 左四（空白2）：分析同上 课后研讨题 1.本实验在37℃ 保温前不加液体石蜡是否可以？为什么？ 不可以，肌糖原的酵解实验最后是测量乳酸的含量，而乳酸的产生是在无氧条件下产生的。糖酵解是糖原在细胞溶胶中经过一系列酶反应生成丙酮酸，在无氧条件下转换为乳酸；若有氧存在，丙酮酸会进入线粒体，在酶催化条件下最终生成水和CO2 2.本实验如何检验糖酵解作用？ 糖酵解作用最后由乳酸的生成来观察，在除去蛋白质和糖后，乳酸和浓硫酸共热变成乙醛，后者再与对羟基联苯反应生成紫红色物质，根据颜色的显色加以鉴定。 3.在乳酸测定过程中，为什么先要进行冰浴并随时冷却？ 浓硫酸接触有水的试剂后会放出大量热，冰浴可以吸收浓硫酸放出的热量。 4.在本实验中，怎样做才可以尽可能减小实验误差得出理想结果？ 实验过程中蛋白质和糖对实验的影响很大，在实验前要把实验所用的试管洗干净，在实验糖酵解过程中要在无氧条件下进行。 5.阐述分析糖酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义 理情况下，大多数组织有足够的氧以供有氧氧化之需，很少进行糖酵解，因此这一代谢途径供能意义不大，但少数组织，如视网膜、睾丸、肾髓质和红细胞等组织细胞，即使在有氧条件下，仍需从糖酵解获得能量。在某些情况下，糖酵解有特殊的生理意义。例如剧烈运动时，能量需求增加，糖分解加速，此时即使呼吸和循环加快以增加氧的供应量，仍不能满足体内糖完全氧化所需要的能量，这时肌肉处于相对缺氧状态，必须通过糖酵解过程，以补充所需的能量。在剧烈运动后，可见血中乳酸浓度成倍地升高，这是糖酵解加强的结果。又如人们从平原地区进入高原的初期，由于缺氧，组织细胞也往往通过增强糖酵解获得能量。在某些病理情况下，如严重贫血、大量失血、呼吸障碍、肿瘤组织等，组织细胞也需通过糖酵解来获取能量。倘若糖酵解过度，可因乳酸产生过多，而导致酸中毒。 5.总结本实验操作的关键环节和注意事项。 实验成功的两个关键步骤： （1）向空白管加入30%三氯乙酸。30%三氯乙酸的作用是使肌肉糜失活，这一步一定要保证肌肉糜完全失去活性，以增强最终显色的比色效果，判定肌肉糜失活的标识是肌肉糜呈惨白色，无血色。 （2）加入饱和CuSO4和Ca(OH)2粉末。加入饱和CuSO4和Ca(OH)2粉末的作用是