1.4蛋白质工程的崛起(上课用)选编.ppt

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何谓蛋白质工程? 1983年美国科学家Ulmer首先提出蛋白质工程,它是指按照特定的需要,对蛋白质进行分子设计和改造的工程。自此以后,蛋白质工程迅速发展,已成为生物工程的重要组成部分。   为什么要进行蛋白质工程? 阅读P26 一、蛋白质工程崛起的缘由 例如: 改造 干扰素(半胱氨酸) 体外很难保存 干扰素(丝氨酸) 体外可以保存半年 玉米中赖氨酸含量比较低 天冬氨酸激酶 (352位的苏氨酸) 二氢吡啶二羧酸合成酶(104位的天冬酰胺) 天冬氨酸激酶 (异亮氨酸) 二氢吡啶二羧酸合成酶(异亮氨酸) 玉米中赖氨酸含量可提高数倍 改造 改造 干扰素是一种抗病毒、抗肿瘤的药物。将人的干扰素的cDNA在大肠杆菌中进行表达,产生的干扰素的抗病毒活性为106 U/mg,只相当于天然产品的十分之一,虽然在大肠杆菌中合成的β-干扰素量很多,但多数是以无活性的二聚体形式存在。为什么会这样?如何改变这种状况?研究发现,β-干扰素蛋白质中有3个半胱氨酸(第17位、31位和141位),推测可能是有一个或几个半胱氨酸形成了不正确的二硫键。研究人员将第17位的半胱氨酸,通过基因定点突变改变成丝氨酸,结果使大肠杆菌中生产的β-干扰素的抗病性活性提高到108 U/mg,并且比天然β-干扰素的贮存稳定性高很多。 预期蛋白质功能→设计 →推测应 有的 序列→找到对应的 序列。 二、蛋白质工程的基本原理 1、目标:根据人们对 功能的特定需求,对蛋白质的 进行分子设计。 蛋白质 结构 2、原理: 3、操作流程: 预期的蛋白质结构 氨基酸 脱氧核苷酸 改造基因 某多肽链的一段氨基酸序列是“—丙氨酸—色氨酸—赖氨酸—甲硫氨酸—苯丙氨酸—”, (1)怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列?请把相应的碱基序列写出来 (2)确定目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改造目的基因(DNA)?  (1)根据氨基酸序列反推mRNA上密码子序列,再反推DNA上脱氧核苷酸序列。其DNA碱基序列为: (2)确定目的基因的碱基序列后,就可以根据人类的需要改造它,通过人工合成的方法,或从基因库中获取。 基因 DNA 氨基酸序列 多肽链 蛋白质 三维结构 预期功能 生物功能 mRNA 转录 翻译 折叠 DNA合成 分子设计 基因 DNA 氨基酸序列 多肽链 蛋白质 三维结构 预期功能 生物功能 mRNA ③ ④ ⑤ ② ① 蛋白质工程的概念 基础: 蛋白质工程的实质: 途径: 目标: 蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系 基因修饰或基因合成 改造现有或制造新蛋白质,满足人类需要 对基因进行改造 旁栏思考题 你知道人类蛋白质组计划吗?它与蛋白质工程有什么关系?我国科学家承担了什么任务? 人类蛋白质组计划是继人类基因组计划之后,生命科学乃至自然科学领域一项重大的科学命题。2001年,国际人类蛋白质组组织宣告成立。之后,该组织正式提出启动了两项重大国际合作行动:一项是由中国科学家牵头执行的“人类肝脏蛋白质组计划”;另一项是以美国科学家牵头执行的“人类血浆蛋白质组计划”,由此拉开了人类蛋白质组计划的帷幕。 三、蛋白质工程的进展和前景 前景诱人: 不足: 基因工程与蛋白质工程 基因工程 蛋白质工程 操作场所 操作对象 操作起点 基本过程 结果 联系 生物体外 生物体外 基因 基因 目的基因 预期蛋白质功能 获取目的基因→ 构建表达载体→ 导入受体细胞→ 目的基因的检测与鉴定 预期蛋白质功能→ 设计蛋白质结构→ 推测氨基酸序列→ 推测核苷酸序列→ 合成DNA → 表达出蛋白质 生产自然界中已有的蛋白质 生产自然界没有的蛋白质 蛋白质工程是在基因工程的基础上,延伸出来的第二代基因工程。因为对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质,必须通过基因的修饰或基因的合成。 基因定点诱变技术的示意图 基因定点诱变技术的理解(苏教版)  项目       内容 条件 原料 酶 引物 能量 ATP 操作方法 PCR法 结果 适应范围 后代中半数为诱变的DNA分子 脱氧核苷酸 DNA聚合酶和DNA连接酶 含突变顺序的DNA分子片段 空间结构完全清楚的蛋白质 思考:基因定点诱变技术与基因突变的比较 比较 基因定点诱变 基因突变 相同点 发生的过程 结果 不同点 场所 手段 方向 DNA复制过程中 产生新基因,从而产生新性状 生物体外 生物体内 定向改造 不定向性 PCR技术 物理化学方法 蛋白质的分子设计与改造 蛋白质工程首先是以

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