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硕士论文 角膜移植排斥反应相关的泪液蛋白组学研究 地塞米松14d)。其余操作同第一章。 结果 1．用药组除第2天外，其他时间点RI均低于未用药组。地塞米松组和CsA组 之间RI无明显差异。 2．共鉴定出iTRAQ标记的差异蛋白440个。 3．地塞米松组2天、7天、14天这三个时间点发生显著上调／下调的蛋白分别 为：36个、41个、9个。 4．环孢素组2天、7天、14天这三个时间点发生显著上调／下调的蛋白分别为 45个、49个、43个。 5．对地塞米松组进行GO分析发现细胞的死亡与存活，皮肤疾病，蛋白合成， 神经系统疾病等有关的生物学过程富集程度较高，pathway分析显示显示EIF2 信号通路、LXR／RXR活化信号通路、网格蛋白介导的内吞作用信号通路、急性期 反应信号通路富集度较高。与未用药移植组相比，LXR／RXR活化信号通路、网格 蛋白介导的内吞作用信号通路、急性期反应信号通路和肌动蛋白细胞骨架信号通 路均有不同程度的下降。 6．对环孢素组进行G0分析发现细胞的死亡与生存、蛋白合成、皮肤疾病、免 通路、网格蛋白介导的内吞作用信号通路、急性期反应信号通路富集度较高。与 未用药移植组相比，网格蛋白介导的内吞作用信号通路、急性期反应信号通路、 肌动蛋白细胞骨架信号通路的富集度均有不同程度下降。 3．40，14d=3．02)。 8．DBP在用药组显著低于未用药组。 结论 1．EIF2信号通路可促进角膜内皮细胞的一些损伤修复机制，从而使其能够更好 的跨过细胞阻滞，抵抗凋亡。 2．急性时相蛋白与角膜移植排斥的发生密切相关。与未用药组相比，其在用药 组中明显降低，提示急性时相反应蛋白还与与排斥的程度相关，因此，泪液中的 急性时相蛋白可能可作为植片排斥的检测指标，指导临床的早期诊治和检测疗效。 3．抗排斥药物可能通过降低coronin-iA的表达，影响T细胞的迁移和T细胞 与APCs相互作用，从而减轻角膜移植排斥反应。 万方数据 硕士论文 角膜移植排斥反应相关的泪液蛋白组学研究 4．抗排斥药物干预对于DBP有明显影响，可以考虑DBP作为评价角膜移植术后预 后的指标。 第三章人泪液中角膜移植排斥反应相关蛋白筛选及临床应用初探 目的 应用iTRAQ蛋白质组学技术，对临床PKP术后发生角膜移植排斥反应和未发生角 膜移植排斥反应病人泪液中的蛋白质组进行检测，以求在动物模型的基础上，进 一步深入研究探索角膜移植排斥的发生机制，并发现新的生物学标记物，为排斥 发生的早期诊治和新药的开发提供新思路。 材料与方法 1． 穿透性角膜移植术后，发生急性排斥的患者10例，简称排斥组，收集其泪 液；穿透性角膜移植术后(2周)未发生排斥的患者10例，简称未排斥组。排 斥组和未排斥组术后按常规局部或全身使用糖皮质激素、环孢素A以预防术后排 斥。 2．排斥组患者在临床诊断为角膜移植排斥反应时收集基础泪液，未排斥组于术 后2周采集。泪液样本置于一80℃保存。 3．iTRAQ四标标记：117未排斥组；121排斥组。差异表达蛋白界值设定：大 章相关内容。 4． 利用Ingenuity生物通路分析软件分析所鉴定蛋白间的交互作用。 结果 1．发生排斥的10例患者中，包括4名角膜白斑、3名病毒性角膜炎、1名真菌 性角膜炎、1名角膜穿孔和一名未规律用药的圆锥角膜。 2．共鉴定出iTRAQ标记的蛋白428个。显著变化的差异蛋白7个，上调的有丛 4)和a一淀粉 生蛋白(Clusterin)、富含脯氨酸蛋白4(proline—richprotein 酶2B(o-amylase (extracellular albumin)和转 glycoproteinlacritin)、血清白蛋白(serum factor