基于ITS序列和RAMS标记分析青枯雷尔氏菌的遗传多样性.doc

基于ITS序列和RAMS标记分析青枯雷尔氏菌的遗传多样性* 郑雪芳，车建美，林营志，蓝江林，刘波( （福建省农科院生物技术研究所，福州 350003） 摘 要：应用ITS序列和RAMS技术对福建省不同地域，不同寄主作物的21个青枯雷尔氏菌株进遗传多样性分化研究。结果表明，供试的21株青枯雷尔氏菌的ITS区序列有3种类型，这3种类型菌株的ITS序列只有1-2个碱基的差异，与参比菌株GMI1000的ITS区序列或者相同或者有一个碱基的差异。在此基础上，利用RAMS技术进一步分析表明，21个供试的青枯雷尔氏菌及参比菌株GMI1000的基因组DNA间存在丰富的多态性。聚类分析这22个菌株，可聚为3个簇群。从聚类结果显示，青枯雷尔氏菌的遗传分化与寄主作物和地理来源都存在相关性，与寄主作物的关系更密切。 关键词：青枯雷尔氏菌；遗传多样性；ITS；RAMS DNA Polymorphism Analysis of Ralstonia Solanacearum ZHEN Xue-Fang, CHE Jian-Mei , LIN Ying-Zhi,Lan Jianglin,LIU Bo (Biotechnology Institute，Fujian Academy of Agricultural Sciences，Fuzhou 350003，China) Abstract:DNA polymorphism among 21 strains of Ralstonia solanacearum from different climate zones and different host crop was analyzed by ITS sequence and RAMS methods respectively. Three types of ITS sequence were obtained. Among them, there was only one or two base diversity, and ITS sequence of tested strains was the same to GMI1000 or one base difference to GMI1000.The total genomic DNA was then examined by sensitive RAMS technique. The results revealed an obvious diversity of their genomic DNA. Cluster analysis based on the RAMS bands showed that 22 isolates could be separated into 3 clusters. It is concluded that genetic diversity of R(solanacearum comes from different host crop and different climate zones, mostly comes from different host crop. Key words：Ralstonia solanacearum；DNA polymorphism；ITS；RAMS 【本研究的重要意义】细菌性青枯病是由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的毁灭性植物病害，广泛分布于热带、亚热带及温带地区，在我国南方各省市均有严重发生。已报道的发生青枯病的植物超过50多个科，有200多个种[1]，包括茄科植物、木麻黄属、鹤望兰属、姜属、芭蕉属、花生等。许多经济地位很重要的作物如马铃薯、番茄、烟草、香蕉及部分贵重药材和花卉均受其害，是生产上主要的限制因子。研究青枯雷尔氏菌的遗传多样性对于了解青枯病的发生、流行，并对其进行病害的及时防治具有十分重要的意义。【前人研究进展】现已建立一系列分析青枯雷尔氏菌遗传多样性的方法，例如，seal等[2]，用RNA保守物PCR技术将来源不同的112个青枯雷尔氏菌划分为3个“指纹”组，结果与COOK等[3]报道的利用RFLP技术获得的青枯雷尔氏菌“区组”相吻合。Gilling等[4]通过对扩增的多聚半乳糖醛酸酶基因片段RFLP分析，将来源不同的48个青枯雷尔氏菌分离的分为6个RFLP型；Julin等[5]应用RC-PFGE 和REP-PCR技术研究了46个肯尼亚青枯雷尔氏菌分离物及39个来自不同国家菌株的遗传多样性，并进行了“分型”，前人研究表明了青枯雷尔氏菌DNA存在丰富的遗传多样性。【本研究的切入点】本文在以往研究基础上，采用ITS序列分析法结合RAMS（Random Ampilifi