1.组织病理学制片技术讲解.pptVIP

(一)切片前的准备 1. 备齐常用器具, 如玻片、毛笔和铅笔或刻字笔。 2. 检查切片机的工作状态, 将固件都拧紧，检查切片刀是否锋利, 切片刀质量是保证切片的关键。如果使用一次性刀片, 应根据切片情况及时调整刀刃位置。 （二）切片制作过程 1. 蜡块在冰箱中预冷，然后固定在切片机上。将切片刀装在刀架上。调整蜡块与刀的位置，使蜡块切面与刀刃接近。 2.切片机多为轮转式，使用时左手执毛笔，右手旋转切片机转轮。先修出标本，直到组织全部暴露于切面为止，标本过小时修块应多加注意，大标本要切全。切出蜡带后，用毛笔轻轻挑起一端，用镊子夹起另一端，正面向上放入展片水槽中(水温一般低于蜡熔点10~12℃)，待切片展平后，即可进行捞片。 3. 切片时刀是由下向上运动，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分放在上端(如皮肤组织的表皮部分，胃肠等组织的浆膜面等)。 4. 捞片时注意组织片的摆放位置，尽量整齐美观。要留出贴标签的空间， 5. 捞片时注意在切片和玻片之间不要留有气泡。捞好的切片应在60℃左右烤箱内烤至少30min。以防染色时脱片。 * 德江县人民医院病理科 * 病理技术的应用 帮助临床查明死因(尸检); 手术后病变标本，明确诊断(临床活检); 为教学、科研提供资料; 取材(Sample collection)→固定(Fixation)→脱水(Dehydration)→透明(Transparentizing) →浸蜡(Paraffin soaking)→包埋(Embedding) 第一节 组织处理 1. 人为因素 2. 标本大小 3. 取材时间 4. 包埋方向 5. 边缘标记 一、取材(Samples collection) 6. 小标本的处理方法 7. 特殊情况取材 8. 取材数量 9. 清除多余成分 10. 重复取材 11. 核对取材 12. 剩余组织存放 二、固定(Fixation) 固定就是用物理或化学方法，阻止组织细胞离体或培养细胞脱离生存环境后发生形态学变化。 (一)固定的目的 1. 迅速阻断组织细胞离体后的自溶性变化，防止腐败，尽量保持组织细胞生活状态下的形态结构。 2. 使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变成不溶性物质，并保持原有的空间位置。 3. 固定剂有硬化作用,增加组织的硬度,便于制片。 4. 组织中的各种物质经固定后产生对染料的亲和力，利于染色和观察。 （二）常用的固定方法 1. 浸泡固定法 2. 灌注固定法 3. 细胞涂片的固定方法 4. 微波固定法 5. 蒸气固定法 （三）常用的固定液 1. 单纯固定液 (1) 甲醛(formaldehyde) (2) 酒精(alcohol) (3) 苦味酸(picric acid) (4) 丙酮(acetone) (5) 醋酸(acetic acid) 2. 混合固定液 (1) Bouin液 ：用于结缔组织及脂肪染色； (2) Zenker液：常用于三色染色； (3) 4%多聚甲醛-磷酸二氢钠-氢氧化钠液； （四）固定时的注意事项 1. 标本 应新鲜并及时取材，快速放入固定液中。特殊标本应单独固定和存放。 2. 固定液的用量 一般固定液用量为组织块体积的10~20倍，贵重的固定液不少于3~5倍。 3. 防止组织变形 柔软或较薄的组织先平铺在吸水纸上，再投入固定剂中；含气或脂肪多的组织易浮于液面，可在组织表面覆盖棉花以达到充分固定。 4. 固定液的穿透性 一般固定液在24h内不能穿透厚度大于2~3mm的实体组织或5mm的多孔疏松组织，故取材组织块的厚度原则上不应超过3~4mm。 5. 固定时间 固定的时间与固定液的种类、组织类型、块大小、温度等有关。一般1.5cm×1.5cm×0.2 ~0.3cm大小的组织块, 固定时间为12~24h。 6. 固定温度 大多数可在室温(25℃)固定，在低温(如4℃)固定时，固定时间要相应延长。 三、脱水(Dehydration) 组织经固定和水洗后含大量水分，水与石蜡不能混溶。因此在浸蜡和包埋前，必须进行脱水。 常见的脱水剂有乙醇、正丁醇、丙酮等。 为防止水份丢失过快，造成组织变形，一般采用梯度脱水法。也就是使脱水剂的浓度逐渐升高，脱水过程尽量缓和，减少组织变形。 四、透明(Transparentizing) 常用的透明剂有二甲苯、苯、甲苯、氯仿、环己酮、苯甲酸甲酯、香柏油、冬青油和苯胺油等。 目前也有用环己酮作为透明剂，环己酮为无色无毒液体，可与苯、二甲苯和酒精等相混合，也可溶解石蜡。而且脱水时组织不收缩变硬，用于快速石蜡切片效果较好。 五、浸蜡(Paraffin wax soaking)