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实验十
植物细胞骨架的光学显微观察
观察光学显微镜下细胞骨架的结构，了解显示植物细胞骨架的方法及其原理
一、实验目的
细胞骨架是指在细胞中支持和连接细胞各组分，以及与细胞运动有关的结构，它包括微管、中间纤维、微丝。当用适当浓度的Triton X-100处理时，可将细胞内大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白质却仍被保存，经过固定和考马斯亮蓝R250染色，从而在光镜下观察到细胞骨架的网状结构。
二、实验原理
(一)器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
(二)材料：洋葱鳞茎。
三、实验用品
1．M一缓冲液：50mmol／L咪唑，50mmol／L kCl：，0.5 mmol／LMgCl2，lmmol／L EGTA(乙二醇双(a-氨基乙酸)醚四乙酸)，0．1mmoL／L EDTA，lmmol／L巯基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)。
2．6mmol／L PH6．8 磷酸缓冲液。
3．1％Triton X-100，用M-缓冲液配。
4．0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂是甲醇46.5ml，冰乙酸7ml，蒸馏水46.5ml。
5．3％戊二醛，用6mmol／L磷酸缓冲液(PH6．8)配制。
6．5％、7％、95％乙醇。
7．叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。
(三)试剂：
(一)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片温于装有PH6．8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。
(二)吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X-100处理20-30分钟。
(三)吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，每次10分钟。 ．
(四)3％戊二醛固定0.5-1小时(对照组开始处理)。
四、实验方法
(五)PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。
(六)用0.2％考马斯亮蓝R250染色20-30分钟。
(七)用蒸馏水洗1-2次，材料置于载玻片上，加盖玻片，即可镜检。
(八)如作永久制片，可使样品顺序通过如下试剂：50％乙醇，70％乙醇，95％乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液(1：1)，每次5-10分钟，或正丁醇→正丁醇→二甲苯→二甲苯，每次5-10分钟。然后捞取样品，平展于载玻片上，中性树胶封固。
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