第1章新疫苗与基因免疫选编.ppt

Ciemik等 p53蛋白的CTL表位(128~145) + E3引导序列 HIVgp160中的CTL表位(P18ⅢB) + E3引导序列 诱生出保护性CTL应答:与E3引导序列融合表达的表位，基因诱生免疫应答的作用大大强于单用抗原表位的基因免疫。 以抗原表位为基础的细胞内靶向性基因免疫可增强诱生特异性免疫应答的精确性。 3. 复合抗原表位的基因免疫 多种抗原表位基因同时克隆在一个载体里面，来进行DNA免疫——研究最多的方式。 Thomoson等将流感病毒、鼠巨细胞病毒、腺病毒、疟原虫等共10个CTL表位串联表达于真核细胞表达质粒DNA中。 Genes encoding the Epitopes [ NP(147~155), PP89(168~176) , LCMV(118~126) … …] Express the Epitopes CTL COOH 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 NH3 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 4. 以免疫球蛋白基因为载体的表位基因免疫 B细胞表位是天然的， *位于分子的表面或转折处 *为构象依赖性表位 *是抗原分子的三级结构 T细胞表位是抗原提呈细胞加工提呈的抗原肽，呈线性排列 免疫球蛋白分子的互补决定区CDR具有 ——外显性(总是暴露在外，随时准备与相应抗原决定簇结合)； ——空间限构(限定的空间构型——即其空间构型不会因为编码蛋白的后续修饰如糖基化而改变)。 外源B细胞抗原表位 → 直接克隆表达于CDR中→ 利用CDR限定的空间构型，保证表位的构型正确及免疫原性的稳定， 并利用CDR结构外显的特性，使表位的可接近性(accessibility)好，提高表位被吞噬及呈递的效率。 以免疫球蛋白基因为载体的表位基因免疫 以免疫球蛋白基因为载体的表位基因免疫 CDR B cell Epitope Vector containing Ig gene Gene encoding Ig Fab CDR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 B cell Epitope CDR B cell Epitope B cell BCR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 病原菌 (三) 表达文库基因免疫 expression library immunization, ELI ELI技术允许免疫系统自我选择。 ELI技术基本指导思想是将目的抗原的编码基因随机克隆于载体。 将含有成千上万个DNA片段的质粒DNA直接免疫动物，再以相应的病原体感染这些动物，观察是否有保护作用。如有，则可将这成千上万种混合的质粒DNA分组，再免疫，作保护性感染实验。 有保护后再分组直至选出单一保护性DNA片段。 病原体 一个基因 具有所有基 因的文库 常规基因免疫 ELI 病原体 具有所有基因的文库 YES NO YES NO YES NO NO NO ELI特殊应用价值 ②可从有效的表达文库中分离出有保护作用的组分，制备成特异性基因疫苗或重组蛋白疫苗。 ①对于某些抗原成分不明确的病原体，传统的蛋白免疫或基因免疫的应用受到限制，可利用ELI使机体的免疫系统自行筛选有效的抗原基因产物； 工作量非常大，但价值也大。 六、基因免疫的免疫途径和方法 1. 肌肉免疫 (一)免疫途径 2. 皮内免疫 3. 脾脏免疫 4. 其他胃肠外免疫 1. 肌肉免疫 已知肌细胞摄取外源裸DNA和表达转基因产物的效率和持久性是其他组织细胞的100~1000倍。 Wolff等以PCR和Southern杂交证实质粒DNA可在骨骼肌中存在达1年以上。 已在多种动物体内证实肌内基因免疫是诱生特异性体液和细胞免疫的有效途径。 股肌、腓肠肌和胫前肌是肌内免疫中较多采用的肌肉。 作为外源DNA和外源蛋白的储存库，可少量而长期释放外源蛋白 ▽基因免疫成了抗感染免疫等领域的新的研究热点。 基因免疫免去了繁琐的蛋白纯化步骤和免疫佐剂的辅助； 基因在体内的表达及诱生免疫的过程，模拟了自然状态下机体感染外源病原生