RNA提取一般步骤总结-资料中心.doc

RNA提取总结RNA提取一般步骤总结 - E/ a% A-RNA提取原理：通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。- M: d9 I3 }8 YRNA提取的一般步骤4 e$ s p+ [6 l6 m* b　　所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制ＲＮＡ酶活性。RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径:提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。0 i2 O) [7 e1 S P4 K8 l$ ?4 |实验步骤：: ?1 i1 U ^% N% A! z? ???破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。 Q8 E+ S9 a+ v1 m7 i+ ~/ S??V1、 破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行，可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入β-M