项目一(五)：常用生物化学实验技术及原理剖析.ppt

第四节 常用电泳仪简介 一、稳压稳流电泳仪 稳压稳流电泳仪是稳压稳流电泳仪是目前国内中、低压电泳实验中应用最广泛的电泳仪之一。其输出电压的调节范围为0V～600V、输出电流为0 mA～100mA。这种电泳仪工作稳定性好、调节范围宽，并设有完善的短路保护电路和过流保护电路。 稳压稳流电泳仪 第四节 常用电泳仪简介 二、全自动醋纤膜电泳仪 全自动醋纤膜电泳仪为全自动电泳仪，有可见光单系统，使用醋酸纤维薄膜电泳片，优点为自动化程度高。只需将样品、试剂、电泳片放好，人员可离机完成实验并得到结果。 第四节 常用电泳仪简介 三、全自动荧光/可见光双系统电泳仪 全自动荧光/可见光双系统电泳仪只需将样品、试剂和琼脂糖凝胶电泳胶片放好后，其最大优点是荧光系统全自动，只需要20min即可完成电泳分析，速度非常快。操作人员可离机完成实验并得到结果。 第四节 常用电泳仪简介 四、全自动琼脂糖电泳仪 全自动琼脂糖电泳仪，有可见光单系统，使用琼脂糖凝胶电泳胶片。灵敏度高，可适用于低浓度蛋白检验，如尿蛋白、脑脊液蛋白、同工酶的分离。但其自动化程度较差。 由于这类电泳仪所能做的项目较多，且灵敏度较高，仍为许多实验室所接受。 第四节 常用电泳仪简介 五、全自动电泳分析系统 全自动电泳分析系统，将上述仪器的优点集于一身，仪器自动点样、电泳、呈色（或染色、脱色）、烘干，自动化程度非常高。可用各种电泳片，包括琼脂片、醋酸片、聚丙烯酰胺等，采用可见光及荧光呈色双系统，是一种较理想的电泳仪。 全自动电泳仪 第五节 毛细管电泳 一、毛细管电泳的基本工作原理 溶液中的带电粒子以高压电场为驱动力，沿毛细管通道，以不同速度向与其所带电荷相反的电极方向迁移，并依据样品中各 组分之间淌度和分配行为 上的差异而实现分离。 高效毛细管电泳仪 第五节 毛细管电泳 毛细管电泳仪装置示意图 第五节 毛细管电泳 三、毛细管电泳的特点 1. 高灵敏度 2. 高速度 3. 高分辨率 4. 样品少 5. 自动化程度高 6. 应用范围广 TriSepTM-2010GV pCEC System 第五节 毛细管电泳 三、毛细管电泳的分离模式 （一）毛细管区带电泳 它是通过在充满电解质溶液的毛细管中，不同质荷比大小的组分，在电场的作用下，依迁移速度的不同而进行分离。 根据组分的迁移时间进行 定性，根据电泳峰的峰面 积或峰高进行定量分析。 毛细血管区带电泳原理图 第五节 毛细管电泳 （二）毛细管凝胶电泳 毛细管凝胶电泳(CGE) 常用聚丙烯酰胺在毛细管内交联制成凝胶柱，依据分离支撑物的分离作用不同，CGE又分为非变性CGE和变性CGE，前者以分子筛、电荷／质量比的作用进行分离；后者则以质量、分子筛的作用进行分离。 适用于分离、测定肽类、蛋白质、DNA类物质的分离。 第五节 毛细管电泳 （三）毛细管胶束电动色谱(MECC) MECC系统中存在两个相：流动的水相和起到固定相作用的胶束相。 在含有胶束的流动相中，溶质在“水相”和“胶束相”(准固定相)之间进行分配，即使是中性溶质，因其本身疏水性不同，在二者之间的分配也会有差异，疏水性强的溶质在“胶束相”中停留时间长，迁移速度就慢。反之，亲水性强的溶质迁移速度就快，最终中性溶质将依其疏水性不同而得以分离。 第五节 毛细管电泳 毛细管胶束电动色谱原理图 第五节 毛细管电泳 （四）毛细管等电聚焦电泳 不同等电点的分子分别聚集在不同的位置上，不作迁移而彼此分离，这就是等电聚焦分离过程。毛细管的等电聚焦是在毛细管内实现的等电聚焦过程，具有极高的分辨率，通常可以分离等电点差异小于 0.01pH单位的两种蛋白质，例如肽类、蛋白质的分离。 第五节 毛细管电泳 （五）毛细管等速电泳 毛细管内首先导入具有比被分离各组分高电泳淌度的前导电解质，然后进样，随后再导入比各分离组份低电泳淌度的尾随电解质，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中发生分离。 第五节 毛细管电泳 （六）毛细管电色谱 它包含了电泳和色谱两种机制，是在毛细管中填充 或在毛细管壁 上键合（或涂壁）固 定相，从而构成毛细 管色谱柱，依靠电渗 流推动流动相，携带 样品迁移，