实验8植物可溶性糖含量的测定.PDF

实验8 植物可溶性糖含量的测定 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为 目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于 鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。因此，可 溶性糖的定量研究对果树的品质育种具有重要意义。 一、试材及用具 1．试材 新鲜或冷冻的植物材料 2 ．仪器及试剂 高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W 调温电炉以及200mL 、250mL 容量瓶、250mL 锥形瓶及50mL 碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝 溶液等。 二、原理 本实验的主要原理：在加热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时，将费林试 剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚 甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。通过实验，学习并掌握用费林试剂滴定法测定可溶性 糖的原理和方法。 三、方法步骤 （一）试剂配制 1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO ?5H O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL， 4 2 过滤，贮于棕色瓶内。 2 ．费林试剂乙：称取氢氧化钠 50g和酒石酸钾钠（KNaC O H ?4H O ，分析纯）138g 4 6 4 2 溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。 3 ．转化糖标准溶液：称取9.5g 蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL 容量瓶中，加 入6mol/L HCl （分析纯）10mL，加水至100mL。在20～25 ℃下放置三天或在25 ℃保温24h ， 然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4 个月）。测定时，取1%转化糖液25.00mL 放入250mL 容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH 溶液中和后用水定容，即 为1mg/mL 转化糖标准溶液。 4 ．亚甲基蓝溶液：称取0.5g 亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL 水中。 5 ．乙酸锌溶液：称取21.9g 乙酸锌[Zn(OAC) ?2H O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL 2 2 稀释至100mL。 6 ．亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾[K Fe(CN) ?3H O，分析纯]溶于水，稀释至 4 6 2 100mL。 （二）样品提取液制备 取待测样品适量，洗净，用不锈钢刀将可食部分切成适当小块充分混匀后，按四分法取 样。称取100g鲜样加入等重量的水，放入组织捣碎机中捣成1:1 匀浆，有些材料匀浆比例可 适当调整，多汁果蔬类可直接捣浆。称取匀浆25.0g或50.0g （相当于样品12.5g或25.0g ）放 入150mL烧杯中，含有机酸较多的材料加0.5～2.0g粉状CaCO3调至中性（广泛试纸检试）。 用水将样液全部转入250mL容量瓶中，并调整体积约为200mL 。置80 ±2 ℃水浴保温30 min， 期间摇动数次，取出加入乙酸锌溶液及亚铁氰化钾溶液各2～5mL，冷却至室温后，用水定 容，过滤备用。 取已经制备的待测液100mL 于200mL 容量瓶中，加6 mol/L HCl 10mL 。在80 ±2 ℃水 浴加热10min，放入冷水槽中冷却后，加甲基红指示剂二滴用6 mol/L 及1mol/L NaOH 溶液 中和，用水定容。 （三）可溶性总糖测定 1．费林试剂的标定：取费林试剂甲、乙各5.00mL或在测定前先等体积混合后取10.00mL 混合液于 250mL锥形瓶中，放入玻璃珠 4～5 粒，先加入比预测(预测见 2)仅少 0.5mL 的 1mg/mL转化糖标准液。将此混合液置1000W电炉上加热，使其在2min左右沸腾，准确煮沸 2 min ，此时不离开电炉，立即加入0.5%亚甲基蓝指示剂2～3 滴，并继续以每4～5 S的滴 速滴加标准糖液，直至二价铜离子完全被还原生成砖红色氧化亚铜沉淀，溶液蓝色褪尽为终 点。用