冻结速率对血小板冷冻干燥保存的影晌.pdfVIP

细胞/f:.物学杂点 Chines巳 Joumal of Cell Biology 2006 , 28: 481-485 冻结速率对血小板冷冻干燥保存的影晌 周新丽祝宏l 张绍志朱发明l 陈光明*严力行l (浙ìT 大学制冷与低温研究所低温生物实验室，杭州 310027; I 浙江省血液巾，心，杭州 310006) 摘要 冷冻干燥法是使血小板能够长期保存的一种理想方法。冻结过程对血小板的冻千保 存至关重要。采用梯度降温、搁板子页冷、液氮冻结等三种冻结方式，研究了冻结速率对血小板冷 冻干燥保存恢复率的影响。实验结果表明用搁板预冷的方式冻结并干燥的血小板复水后的恢复率 最高，达到(93.0::t: 5.2)% ，此时的冻结速度约为 10 "C.Jmin 。扫描电镜照片显示冻千复水后的血小 板保持了完整的细胞结构，但与新鲜血小板相比咯呈球形。冻干复水后的血小板对 1 U/ml 凝血酶 的最大聚集率接近于新鲜血小板，但聚集速度比新鲜血小板慢。 关键词 血小板;冷冻1 燥:冻结速率 血小板是血液rfJ 的手中重要组成成分，它主要 维持血小板形态和聚集功能的有效性。 参与lfll 栓的形成和凝血过程。在对大量失血和低血 1 小板症，也齿的泊疗过程11 ，需要进行血小板输注。 1 材料与方法 因此，保证足够的血小板储备和供应显得尤为重 1. 1 血小板冻干悬液的准备 要。与 f1 前国 r临床的 22 oC 振荡{呆在浓缩血小板 9 9 新鲜浓缩血小板(1 X 10 - 1.5 X 10 个Iml)来自 和低汹冰冻保存血小板两种技术相比，用冷冻干!民主 健康无偿献血者，由浙江省血液中心提供。富含血 1?d果有血小板克服了方法学仁的局限性: (l )t东 r的 小板的血浆在480 g 离心 15 min ，使血小版沉淀， 血 IJ 、板能够在环境温度 F长时间稳定储存，不需要 弃去上层血浆。然后加适量生理盐水使之悬浮洗 任何低温设备; (2)ì东干的血小板能够在使用时直接 涤，在480 g 离心 10 min 收集血小板，重复此操 复水|币恢复活性，适于应对紧急、止血情况; (3) 冻干 作两次。将洗涤后的血小板重悬于冻干缓冲液中， 的血小板质量大大减轻，便于运输。这些明显的优 9 制成血小板浓度约0.2 X 10 个Iml 的冻「悬液。冻 势使冻下保存血小板在临床上有巨大的应用潜力。 干缓冲液以 9.5 mmol/L HEPES , 142.5 mmo l/L 冷冻干燥过秤包括冻结、初次干燥手rl 二次干燥 NaC l, 4.8 mmo l/L KC l, 1 mmol/L MgC1 1t基准溶 2 兰个环节，通常会对细胞膜丰u 胞内物质造成损伤，