2011CB504300-病毒致癌机制与干预的基础研究讲解.doc

项目名称： 病毒致癌机制与干预的基础研究 首席科学家： 曾益新 中山大学 起止年限： 2011.1至2015.8 依托部门： 教育部  二、预期目标 总体目标 以鼻咽癌、食管癌为模型，结合临床与流行病学，鉴定致瘤DNA病毒EBV、HPV致瘤亚型；阐明致瘤病毒与环境危险因素及宿主易感遗传背景间的交互作用机制；阐明致瘤病毒感染上皮细胞以及诱导其转化的分子机制；发现诊断与治疗的新靶点，为提高病毒感染相关肿瘤的治愈率奠定基础，有望使鼻咽癌、食管癌成为继宫颈癌之后可预防的恶性肿瘤。同时在致瘤病毒感染与肿瘤发生发展的研究领域为我国培养一批优秀人才。 五年预期目标 鉴定与鼻咽癌、食管癌相关致瘤病毒EBV、HPV亚型和变异体。建立致瘤病毒高效感染上皮细胞体外模型并阐明致瘤病毒亚型和变异体高效感染和诱导上皮细胞转化机制。 阐明EBV、HPV与环境危险因素以及基因遗传变异交互作用机制，为人类认识肿瘤发生发展的分子机制、治疗和干预提供理论依据。 从系统生物学角度阐明鼻咽癌、食管癌细胞内信号通路以及病毒激活导致肿瘤细胞裂解的分子机制，明确病毒感染与微环境相互作用机制，发现3～4个新靶点，为发展新的治疗手段奠定基础。 利用创新的减毒活疫苗策略建构得到EBV疫苗株，为EBV免疫治疗开拓新方向。 预计在SCI收录杂志发表论文80篇以上，其中IF5分以上论文超过40篇，争取在《Cell》《 Nature 》《Science》等顶尖杂志上发表高水平论文，申请专利10个。 为我国在病毒感染相关恶性肿瘤研究领域培养一批高水平创新性人才，包括培养15-20名博士后等青年骨干人才，50－60名博士生，50-60名硕士生，产生百篇优秀博士论文1-2篇。  三、研究方案 1）学术思路： 本项目主要的学术思路是：在鼻咽癌、食管癌高发现场前瞻性流行病学研究的基础上，抓住鼻咽癌、食管癌为感染性相关恶性肿瘤的显著特点，鉴定诱导鼻咽癌、食管癌发生发展的病毒亚型，围绕病毒、环境危险因素、宿主易感遗传背景在感染和转化上皮细胞以及肿瘤的发生发展中的作用和分子机制进行系统研究。力争在鼻咽癌、食管癌的病因学、发病机制、早期干预上取得突破性进展，提出防治的新思路和新方法，使鼻咽癌、食管癌成为可早期预防的恶性肿瘤。 本项目中，本团队主要通过鼻咽癌、食管癌相关的致瘤病毒亚型鉴定及致瘤病毒早期感染与转化上皮细胞的机制研究，明确高致瘤性病毒亚型与鼻咽癌和食管癌发病的关系和机制（研究内容一、四）；基于流行病学研究获得环境危险因素与结合高通量筛选技术筛选出易感基因，研究它们与病毒交互作用机制，更好地解决遗传学、环境、病毒与肿瘤发病之间的关系（研究内容二、三）；系统地阐明病毒在细胞内信号通路调控网络及病毒激活导致肿瘤细胞裂解的分子机制，为筛选出一些具有鼻咽癌、食管癌特异性的诊断与治疗新靶点指明了方向，引导针对新靶点的干预基础研究（研究内容五）。五个课题之间互相关联、互相影响，阐明致瘤病毒致癌机制，为鼻咽癌、食管癌这两种恶性肿瘤的早发现、早诊断、早干预提供实践基础和科学依据，并为提高其治愈率创造可能性。上述研究将推动EBV、HPV感染相关其他肿瘤的发病机制和干预研究，使人类在攻克恶性肿瘤的过程中向前迈进坚实的一步。总体的研究方案见下图： 2）技术途径： 本项目在总体目标的架构下分为5个主要的课题方向（见课题设置），各课题方向的主要技术途径总结如下： 课题一：以 PCR-测序技术为主，最终发展为高通量质谱测定方法，确定HPV亚型分布与食管癌相关关系；采用病毒全基因组深度测序技术，并发展 EBV－genome capture 的芯片测序技术，结合生物信息学分析，规模化地系统性筛选、鉴定高发区、高发人群鼻咽癌相关EBV亚型以及与食管癌相关HPV16型变异体。 课题二、三：利用用高密度 SNP 芯片筛查鼻咽癌、食管癌致病基因或位点，揭示在鼻咽癌、食管癌发生发展中起重要作用的遗传变异（CNV和SNP）；运用实时定量 RT-PCR（real -time RT-PCR）、免疫印迹蛋白定量（Western blot）以及免疫组织化学染色等方法，测定针对位于明确的基因编码区或调控区的 CNV（或SNP）所处基因或所调控基因在不同基因型个体的组织（包括靶组织）中的表达差异；用生物信息学方法分析编码 miRNA基因或区域的 CNV；定量分析正常食管或鼻咽组织中特定CNV和miRNA表达水平间的相关性；建立血清 miRNA检测方法并用有显著个体差异的 miRNA 进行大样本量的食管癌及鼻咽癌病例-对照研究，探讨以 miRNA作为食管癌及鼻咽癌预警或早期诊断生物标志的可能性；运用生物化学、分子生物学、转基因或基因沉默（knock-down）等手段揭示在关联研究中发现与食管癌及鼻咽癌密切相关