短梗霉多糖分离纯化和鉴定.pdfVIP

t届中国中西部色谱学术交流会 2006年8月 短梗霉多糖分离纯化和鉴定 禹兴海，傅正生， 陈洁， 冯光华 (西北师范大学化学化工学院，甘肃兰州730030) ■ 鼻： 呆用乙醇沉淀法从短梗霉发酵液中提取水溶性多糖，经击蛋白和脱色，得到白色水溶性粗糖，利用DEAE-纤维素柱盏洗脱得到 Pullulan样品，样品过SephadexG一100凝胶拄，仍为单一对称峰。采用凝胶色谱法和纸层析鉴定纯度，表明为纯品． 关键词：短梗零多糖；分离；纯化 短梗霉多糖(Pullulan)是由出芽短梗霉(Aureobasidium 一种胞外葡聚糖…。其基本结构为葡萄糖经过两个a一1，4糖苷键连接成麦芽三糖，再经过Q一1， 6糖苷键聚合成链状聚麦芽三糖。短梗霉多糖是微生物胞外中具有重要应用价值的一类多糖，具有 许多独特的物理化学和生物特性，故在医药，食品化妆品，烟草和农业等领域得到广泛应用恤】。 1实验部分 I．I材料和试剂 短梗霉多糖由出芽短梗霉菌株AFt盯微生物发酵制得；乙醇．丙酮，乙醚，正丙醇硫酸，蒽酮 1．2租糖制备唧 1．3去色素和脱蛋白 去色素采用H202氧化法H3，脱蛋白采用Savage法嘲。 1．4多糖的分离 1．4．1DEAE-纤维柱层析 集1管，每5管用苯酚一硫酸法跟踪检测，依吸光度对洗脱液体积作图得到洗脱曲线，收集单一峰， 旋转蒸发浓缩后，二次蒸馏水透析48h，冷冻干燥。 1．4．2 G-100凝胶柱层析 Sephadex G一100装柱(IcmX Sephadex 洗脱峰的多糖液，透析冻干，得到多糖(Pullulan)样品。 1．5多糖纯度鉴定 1．5．I纸层析 苯一磷酸溶i薇显色，立即用乙醇漂洗至背景褪色，样品只有一个斑点。 基金项目r甘肃眢商分子材料重点实验室基金和西北师范大学A级重点学科基金 通讯联系人l傅正生。作者l禹兴海．男(1978一)硕士研究生． 99 首届中国中西部色谱掌术交流会 2006年8月 1．5．2凝胶色谱法 x C--100柱(15ram Sephadex G一100柱为单一峰，见图1． 硫酸一葸酮法检测多糖哺1。测定吸光度，绘制洗脱曲线。Sephadex E●u1．on‘V，mU 围1 多糖Seph,Klex6100柱洗脱曲线 2．结果与讨论 出芽短梗霉菌株AF-甜发酵液经分离透析浓缩乙醇沉淀可得到土黄色粗糖，利用H如脱色，产 SephadexG-100凝胶柱层析分离得到得到多糖样品。通过纸层析法和凝胶色谱法鉴定该样品为单一 组分，此外样品红外光谱图显示多处多糖特征吸收峰，说明为短梗霉多糖纯品． 参考文献 1959．36,310—317． 【l】Bender，H．，Wallenfels．K．，Biochem．Biophys．hcta Research，2004．339=447—460 【2】Shingel，K…I．Carbohydrate [3】张汉波．丁骅孙，程立忠等．出芽短梗霉色素变异菌株R45的普鲁蓝糖发酵研究，生物技术．1999，9(4)：18-21 【4】俞丽君。张尔贤．朱悦雄等．梅累肉多糖的分离纯化及分析(J)．1997，33(4)：278-280 ·[5】曹海石，孙宏。粱放等．普鲁兰多糖的分离纯化及结构鉴定．高等学校化学学报，1999．11．1729-1732 C6]张维杰．糖复合物生化研究技术．第二版。杭州。浙江大学出版社。1994。14 100