六分子发光分析法.ppt

本章内容 6. 0 引言 6. 1 分子发光的基本原理 6. 2 分子荧光定量分析 6. 3 荧光光谱仪 6. 4 荧光光谱法的特点及其干扰因素 6. 5 荧光光谱法在农业上的应用 分子发光 分子发光分析：依据物质分子吸收一定的能量跃迁到较高电子激发态后，在返回基态时有光谱辐射而建立的分子方法。 第一节 分子发光的基本原理 一、 分子荧光及磷光光谱的产生 1.1荧光及磷光的产生 基态(S0): 室温下，分子处于基态的振动能级。 所有电子遵从能量最低原理、Pauli不相容原理和洪特规则。 激发态: 被激发后, 能量变高, 属非稳状态。 单重态（S） 三重态（T） 激发态→基态的能量传递途径 1）振动弛豫（Vibrational Relaxation, VR） 在同一电子能级中，电子由高振动能级迅速转至该电子能级低振动能级，将多余的能量以分子振动能形式消耗掉一部分，这样的过程，称为振动弛豫。 高振动能级 → 低振动能级 发生振动弛豫的时间：10-12s 2）内转换（Internal Conversion，IC） 当两个电子能级非常靠近,以致其振动能级有重叠时，发生电子由高能级以无辐射跃迁方式转移至低能级， 相同多重态的两个电子态间的非辐射跃迁 【例】:高电子能能级→→低电子能级 S2 →→ S1 T2 →→ T1 发生内转换的时间： 10-13 ～10-11s 3）外转换（External Conversion，EC） 受激分子与溶剂或其它分子相互作用发生能量转换,而使荧光或磷光强度减弱甚至消失的过程，也称“熄灭”或“猝灭” （quenching）。 4）系间窜跃（Intersystem Conversion，ISC） 　　两个不同多重态之间的无辐射跃迁，如从S1到T1，该跃迁是禁阻的。 但当不同多重态的两个电子能级有较大重叠时，处于这两个能级上的受激电子的自旋方向发生变化，即可通过自旋-轨道耦合而产生无辐射跃迁，该过程称为系间窜跃。 　不同多重态的两个电子能态间的非辐射跃迁 5） 荧光发射 荧光：分子中电子从单重激发态的最低振动能级在很短时间（10-9-10-6s）跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐射称为荧光。 荧光发射：产生荧光的过程 S1→→ S0 6）. 磷光发射 从单重态（S）到三重态（T）分子间发生系间跨越跃迁后，再经振动弛豫回到三重态最低振动能层，最后，在10-4-10s内跃迁到基态的各振动能层所产生的辐射。 1.2 激发光谱与荧光(磷光)光谱 3.激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释 二、荧光与分子结构的关系 1 荧光量子产率 分子产生荧光必须具备的条件： i） 分子具有与辐射频率相应的荧光结构（内因）； ii）吸收特征频率的光后，具一定光量子产率的荧光。 即荧光量子产率（荧光效率或量子效率） ? 足够大. 荧光量子产率/荧光效率或量子效率： 物理意义：表示物质发射荧光的能力。 2、 荧光与分子结构的关系 I. 有机化合物的荧光 1）跃迁类型： ????跃迁是产生荧光的主要跃迁类型。 2）共轭效应： ?脂肪族和脂环族化合物少 例：维生素A 327nm 510nm ?芳香族化合物 共轭度越大，荧光越强。 原因：电子非定域性越大，易激发，从而有利于荧光的发生。 【例】: 在苯中荧光效率 ph（CH=CH）3ph 0.68 ph（CH=CH）2ph 0.28 3）刚性结构： 多数具有刚性平面结构的有机分子具有强烈的荧光。 原因：这种结构可以减少分子的振动，使分子与溶剂或其它溶质分子的相互作用减少，也就减少了碰撞去活的可能性。 分子刚性（Rigidity）越强，分子振动少，与其它分子碰撞失活的机率下降，荧光量子效率提高。 4）取代基效应： ①给电子取代基增强荧光 原因：p-?共轭，增强了电子共轭程度，使最低激发单重态与基态之间的跃迁几率增大。 【例】：-OH、-OR、-NH2、-CN、-NR2 等； ②吸电子基降低荧光 例：-COOH、-C=O、-NO2、-NO、-X、（-NH-N=N-）等； 【例】： 硝基苯为非荧光物质， 苯酚、苯胺荧光较苯强。 重原子效应：将一个高原子序数的原子引入到发光分子的电子体系中，会增加磷光而减弱荧光现象。 【例】： 氟苯的荧光效率 0.16 氯苯的荧光效率 0.05 溴苯的荧光效率 0.01 ④ 取代基的空间位置影响 分子结构空间障碍的影响 【例】：萘环上的8位引入磺酸基，使-NH2或-N(CH3)2基与萘