八基因重组和转座.ppt

第 8 章 基因重组和转座 2.同源重组的分子模型——Holliday模型 此模型中，同源重组主要有4个关键步骤 ： ①两个同源染色体DNA排列整齐 ②一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应的链连接，形成Holliday中间体 ③通过分支移动产生异源双链DNA ④Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA，分别为： 二、同源重组的酶学机制 　 　 　 　 　　 　 　 　　 第二节 位点特异性重组 第三节 转座 一、原核生物转座子类型 三、真核生物转座子 λ噬菌体的生活史 溶菌生长途径 (lysis pathway) 溶源菌生长途径 (lysogenic pathway) 例： 位点特异性重组广泛存在于各类细胞中，起着十分特殊的作用，彼此有很大的不同。它们的作用包括某些基因表达的调节，发育过程中程序性DNA重排，以及有些病毒和质粒DNA复制循环过程中发生的整合与切除等。 此过程往往发生在一个特定的短的(20～200 bp)DNA序列内(重组位点)，并且有特异的酶(重组酶)和辅助因子对其识别和作用。 　 特异位点重组的结果决定于重组位点的位置和方向。 如果重组位点以相反方向存在于同一DNA分子上，重组结果发生倒位。 重组位点以相同方向存在于同一DNA分子上，重组发生切除； 在不同分子上，重组发生整合。 特异位点重组的结果依赖于重组位点的位置和方向。重组位点以白箭头表示。A重组位点反方向位于同一DNA分子，重组结果发生倒位。B重组位点同方向位于同一DNA分子，重组发生切除；位于不同分子，重组发生整合 位点专一性重组最早是在λ噬菌体的遗传学研究中发现的。 λDNA通过重组整合到大肠杆菌染色体的专一性位点上，转变成为原噬菌体DNA的非活性状态。 一般位点专一性重组都具有λ整合作用的两个基本特征：①交换是相互的和保存原先的DNA，是典型的保守性重组（conservative recombination）；②它发生在噬菌体和细菌DNA短同源序列中的专一性核苷酸上。 一、λ噬菌体的整合与切除 λ噬菌体侵入大肠杆菌细胞后，面临着裂解生长还是溶源生长两种生活型的选择，其DNA在不同生活型之间的转换包括两种状态：进入溶源状态需要λDNA整合（integrate）进宿主DNA，噬菌体DNA是细菌染色体的整合部分；由溶源状态进入裂解状态需要λDNA从宿主DNA上切除（excise）下来，λDNA在宿主细菌中 以环状分子独立存在。 这里，整合和切除均通过细菌DNA和λDNA上特定位点之间的重组而实现。这些特定位点叫附着位点（attachment site或att）。 细菌的附着位点称attB，由序列B、O和B’组成，噬菌体的附着位点称attP，由序列P、O和P’组成。其中B、B’、P、P’的序列各不相同，而O序列是attB和attP所共有的，说明在这些位点处发生的重组反应。 整合 BOB’ λ噬菌体的位点专一性重组 Int 切除 Xis IHF POB’ attR BOP’ attL 原噬菌体DNA Int IHF 细菌DNA 噬菌体DNA attB attP POP’ + 由于噬菌体DNA是环状的，在重组过程中，它以线性形式插入细菌染色体中，此时原噬菌体被重组产生的两个新att位点所固定。所以，形成这两个新的附着位点attL（BOP’）和attR（POB’）是很重要的，这样可以使整合和切除反应不在一对相同的反应序列之间发生。整合过程要求在attB和attP之间进行识别，而切除过程则在attL和attR之间识别。 因此，位点专一性重组反应的定向特征取决于重组位点的识别。尽管重组反应是可逆的，但反应导向则由不同条件决定，这是噬菌体生活过程的重要特征，因为它保证了整合反应不会立即被切除反应所逆转。反之亦然。 　 二、位点特异性重组的分子机制 　 转座因子(transposable element)是一种可以由染色体的一个位置转移到另外位置的遗传因子，也就是一段可以发生转座(transposition)的DNA，又称为转座子(transposon)。 转座的位置通常或多或少是随机的。当转座子插入一个基因内时，该基因即失活，如果是重要的基因就可能导致细胞死亡。因此转座必须受到控制，并且频率都很低。 转座子对基因组而言是一个不稳定因素，它可导致宿主序列删除、倒位或