一种适宜春兰快速增殖培养基组合物及其方法.doc

一种适宜春兰快速增殖培养基组合物及其方法 技术领域 本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及兰科植物春兰组培苗的优化培养基配方及其快速繁殖方法。 背景技术 春兰（cymbidium goeringii），别名小叶青，属兰科植物，分布于中国江苏、浙江、湖北、贵州、四川、广东、福建等省，主要产地在大盘山、天目山，是名贵珍稀濒危药用植物资源，性寒，味淡；清肺止咳，治支气管炎，解毒消肿，活血止痛，软坚散结；外用治毒蛇咬伤，痈疖疮疡；另外，斑叶兰叶片十分美丽，可作观赏植物栽培，十分精美，有宝石兰之称。由于其用途广泛、药效显著，经药农大肆采掘，已处于濒危境地。 春兰种子构造非常简单，极其细小似灰尘，人们至今还没有发现比它更小的种子，没有胚乳，只有薄薄的一层种皮和少数供自己生长、发育需要的养料，所以它的生命力很弱，极易夭折，用这些种子来繁衍后代，几乎是不可能的。斑叶兰在自然界一般靠无性繁殖，但繁殖率很低，加上人为肆意采挖，故已濒临灭绝。兰科植物应用植物组织培养技术进行快速育苗，已有成功的例子，如大花蕙兰、蝴蝶兰等，大花蕙兰主要是利用其腋芽多的特点进行腋芽组培获得成功，蝴蝶兰主要采用无菌播种技术，再经原球茎分化幼苗途径大量获得试管苗。但大家知道，兰科植物组培经原球茎分化幼苗途径存在种性易分化，后代不整齐，和多一道原球茎增殖环节，延长一个繁殖阶段（30~45天），增加了生产成本。斑叶兰虽属兰科植物，但至今尚未见有组培成功的报道；斑叶兰从种子结构到植株生长发育对光、温、水、肥、气均有一定的要求，所以无论是组培育苗还是组培苗移栽，如何摸索创造条件以满足斑叶兰植物对上述因子的特定要求，是组培成功的关键。 发明内容 本发明目的是克服以上存在不足，提出一种适于春兰组织培养的优化培养基配方；本发明的另一目的是提出春兰应用该配方进行快速、低成本繁殖组培优质苗的方法。 本发明提出的适于春兰组织培养的优化培养基，由基本培养基及分别适用于不同组培阶段的培养基组成，各培养基添加物含量为： 基本培养基：选用MS培养基或改良MS培养基（1∕2MS），该培养基蔗糖或白糖20～30 g/L，琼脂7～9 g/L ，pH为5.0～6.0； 诱导培养基：MS+6-BA2.0～5.0 mg/L + NAA 0.1～0.5mg/L或IBA0.1～0.5mg/L； 增殖培养基：MS+6-BA2.0～5.0 mg/L + NAA 0.1～0.5mg/L或IBA0.1～0.5mg/L； 壮苗培养基：MS+6-BA0.2～2.0 mg/L + NAA 0.1～0.5mg/L或IBA0.1～0.5mg/L； 生根培养基：MS或1/2MS + IBA0.1～0.5 mg/L和NAA 0.1～0.5 mg/L及活性碳1 g/L中的任意一种、二种或三种的混合物。 所述斑叶兰优化组培培养基，其基本培养基与各阶段培养基添加物含量为： 基本培养基：MS或1/2MS，其中蔗糖30 g/L，琼脂7 g/L ，pH5.4； 诱导培养基：MS+6-BA3.0 mg/L +IBA 0.5mg/L； 增殖培养基：MS+6-BA3.0 mg/L +NAA 0.5mg/L； 壮苗培养基：MS+6-BA1.0 mg/L +NAA0.1mg/L； 5）生根培养基：1/2MS+ NAA 0.5mg/L + IBA 0.5mg/L +活性碳1 g/L； 斑叶兰应用上述组培培养基进行快速组培繁殖的方法，包括如下步骤： 1）外植体的选取与灭菌：取斑叶兰茎尖、茎段、叶柄、叶片或根，经灭菌处理后备用； 诱导培养：在无菌条件下将外植体切段或切片接种在诱导培养基上，经30天左右直接从外植体诱导出初代幼芽或丛芽； 增殖培养：在无菌条件下将初代幼芽或丛芽接种在增殖培养基上，培养30～45天分化出大量继代幼芽或丛芽； 壮苗培养：将继代幼芽或丛芽接种到壮苗培养基中，约30天后，幼苗长高、叶片长大，株高和叶面积可增加3～5倍。 生根培养：将生长达2～5厘米的继代幼芽或丛芽接种到生根培养基中，约20～30天后，幼苗基部长出数根根系； 组培苗的驯化与移栽：将生长达3～7厘米以上的培养瓶生根幼芽苗或丛芽苗，移至常温下适应3~5天后，打开盖子再适应3~5天，洗清根部培养基后移栽入树皮碎块或其它基质中。 本发明的有益效果是： 1）提出的斑叶兰组培优化培养基针对性强、适用性好，由于提高了细胞分裂素浓度，芽的诱导率达90%以上；芽的增殖率每个培养周期达3～5倍，年组培苗生产能力可达100万苗以上（一年为8个培养周期）；经增设的壮苗培养基培养后成苗生长速度加快，20～30天苗高可达2～5厘米，生根率达100%；移栽成活率90%以上； 2），该方法由于提高了细胞分裂素浓度并加强前期光照量，促使从外植体快速直接诱导出幼芽或丛芽，达到了仅采用少量外植体材料，即