核医学第6章放射性核素示踪技术介绍.pptVIP

研究物质转化的目的要揭示机体内重要生命物质的前身物、中间物、及产物的关系，以及完成某种转化的必要条件。该方法是目前最常用最理想的方法之一，可以在整体、离体的条件下进行，不但能够对前身物、中间物，产物作定性分析，还可用来研究前身物转化为产物的速度，转化的条件，转化的机制及各种因素对转化的影响等。 §3 物质转化的示踪研究 一、掺入实验(incorporation experiment) (一)基本原理 要研究生物体系中化合物A和B是不是前身物和产物的关系，可将A的适当部位用放射性核素标记。进入生物体系(整体或离体组织)后一定时间，分离出B。如在B中出现较多的标记核素，说明A的标记原子、标记基团或整个标记分子已掺入到B中，即证明化合物A是产物B的前身物。 (二)掺入实验的类型 1、整体(in vivo)掺入实验 多采用动物实验。整体实验有利于观察某一物质在体内转化的全貌。同时，某些酶系统作用的研究有时只能在整体进行。但由于体内有循环交换及代谢旁路，不易弄清转化过程的细节。 2、离体(in vitro)参入实验 研究物质转化过程的细节常采用离体参入实验，实验条件易于控制，有利于在分子水平阐明转化过程的具体步骤，转化条件及影响因素。 一般用于离体掺入实验的生物材料主要有组织切片、组织匀浆、游离细胞、亚细胞颗粒或无细胞酶系统，要求研究材料保持生理活性，至少在进行实验期间能与引入的标记物相互作用。 (三)基本方法 选择合适的标记物 将标记物引入生物体系 分离产物 测量产物 (四)要求与条件 标记前身物用量是示踪量且具有相对高的比活度 放化纯度要高(95%) 分离的产物要求达到放化纯 （五）掺入实验实例 淋巴细胞转化实验:人外周血T淋巴细胞在PHA的刺激下发生母细胞转化而增殖，处于S期的细胞不断地摄取 TdR（胸腺嘧啶核苷，DNA合成的前身物）用以合成DNA，与此同时，3H-TdR也不断地被摄入细胞内。通过液闪计数测量，可了解淋巴细胞增殖活动的情况，借以了解机体的细胞免疫功能。 如果用于肿瘤细胞研究，可以反映活动周期肿瘤细胞的数量或细胞的增殖活力，对研究肿瘤的发生、发展，疗效观察及预后判断具有重要的意义。 * * * (一)类型： 1、整体示踪实验：将标记物引入完整的机体，从体外或取标本观察标记物的去向，以了解示踪剂在机体内的运动规律，主要用于研究物质在体内的吸收，分布、代谢和排泄过程。 2、离体示踪实验：指从整体中分离出来的组织或细胞等简单系统进行的实验。多用于蛋白质、核酸等的转化规律以及某些精细结构的功能研究。 三、核素示踪实验的基本方法及注意事项 3.双标记示踪实验：其原理就是将两个研究对象包括两种分子或是一种分子的两种形态或是一种分子的两个部分，分别带上示踪原子，通过采用相应的测量方法，分析两种标记原子的量，观察它们经过运动转化前后比值的变化，判断该两种观察对象的运转规律。 多用于研究物质代谢过程中某分子内两部分的代谢规律，或同种分子在不同形态或不同物质的运动转换规律。 1、标记物的选择： ①射线类型：体内示踪实验宜选用γ射线发射体，如131I、99mTc；离体示踪或整体给示踪剂后取样进行离体测定的研究则多选用β射线或低能γ射线发射体，如3H、14C及125I等，便于防护和测量。放射α射线的核素半衰期一般比较长，且测量比较困难，因此一般不用作示踪剂。 (二)实验方法及应注意的问题 ②半衰期： 体内示踪实验一般选用短半衰期核素，使机体受到的内照射剂量较低，但也不宜太短，否则会对标记和测量带来困难。如常用99mTc(6.02h)。 体外测定则用半衰期长的放射性核素。如T4放免实验，采用125I(60天)，而不用131I(8天)。 若研究生物体蛋白质、氨基酸代谢及很多药物在体内的代谢转化，则应选用半衰期长的核素，如3H(12.35年)、14C(5730年)等。它们都是组成蛋白质等有机物的基本元素，易于制成定位标记化合物，由于半衰期长，在实验周期中其测量数据基本上可不考虑做物理半衰期的校正。 (二)实验方法及应注意的问题 ③放化纯度：必须经过纯化及鉴定。一般要求标记物的放化纯度95%。 ④衰变产物的毒性：选用一种放射性核素，除要考虑这种核素本身对机体无害外，还要求其衰变后的子代产物对机体无害。如214Po(T1/2=10h)，衰变后的子代产物为210Pb(T1/2=22年)，对机体有害，不能使用。 ⑤比活度：根据示踪实验灵敏度要求选择适当的比活度： 整体示踪实验时，标记物的引入基本不改变该物质的体内含量，同时要求能经得起体内的稀释，使放射性测量的统计误差在允许范围内。 有时需要有意识地给足一定的化学量，才能模拟实际情况，此时比活度