采用X射线衍射解析人RalGDSRas结合结构域.doc

采用X射线衍射解析人RalGDS Ras结合结构域的空间结构 黄雪英1，雷 明2，沈 阳3，张 巍2，刘艳丽2，刘 珂2，赵浩斌2，祁 超2* （1.华中师范大学化学学院，武汉 430079；2.华中师范大学生命科学学院湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室，武汉 430079；3.多伦多大学结构生物学中心，加拿大M5G 1L7） 摘要 Ras结合域（RBD）是RalGDS家族成员C-端的高保守区，通过它连接Ras和Ras相关蛋白。利用Red Wings和SGC-1 screens相关的悬滴法设盘结晶按体积比1:1的比例加蛋白液到含1:100胞内蛋白酶Glu-C（w/w）的结晶溶液（2 M (NH4)2SO4、0.2 M NaAc、0.1 M HEPES、5% MPD、pH 7.5）中晶体3天长成可组装大小。利用X-射线晶体衍射技术解析了人RalGDS的Ras结合域（RalGDS-RBD）的晶体结构对比鼠和人RalGDS-RBD，主要是Ras结合区的C-端不同。人RalGDS-RBD通过Glu838和Glu840在RalGDS和Ras蛋白间形成氢键。而在同一位点，鼠RalGDS-RBD通过Asp820和Asp822形成氢键。人RalGDS-RBD结构中含ββαββαβ-型三维结构的泛素样构象。一个单体的C-端残基与相邻单体的β折叠形成βββββ结构。 关键词 RalG