组织蛋白酶S敲除对小鼠腹主动脉瘤巨噬细胞MMP-9表达的影响.pdf

安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2013Apr；48(4) ·365 · 组织蛋白酶 S敲除对小鼠腹主动脉瘤巨噬细胞 MMP．9表达的影响 秦彦文 ，张耀中 ，曹 旭 ，刘 欧 ，陈 忠 ，张宏家 摘要 目的 探讨组织蛋 白酶 S(CatS)对血管紧张素 Ⅱ 减轻血管紧张素 Ⅱ(angiotensinII，Ang1I)灌注载 (AngⅡ)灌注载脂蛋白E基因缺陷小鼠(ApoE一／一)导致腹 脂蛋 白E基因缺陷小 鼠(apolipoproteinE，ApoE一／一) 主动脉瘤 (AAA)病变中基质金属蛋白酶_9(MMP一9)表达 的 而导致AAA的形成，主要通过减轻炎症、血管新生、 影响。方法 AngⅡ以1000ng／(kg·min)的剂量持续灌 平滑肌细胞凋亡等关键环节。但是关于CatS与另 注ApoE-／．小鼠及CatS、ApoE双敲除小 鼠(CTSS-／-ApoE-／一 一 参与AAA形成的重要蛋 白酶——MMPs家族中 小鼠)28d建立小鼠AAA模型，以等量生理盐水灌注的小鼠 的MMP．9的关系尚未见报道。该研究分别在小鼠 作为对照组，采用免疫组织化学法观察小鼠AAA病变 中 AAA模型和离体巨噬细胞水平上观察CatS敲除对 MMP-9的蛋白表达。分离ApoE-／一小 鼠和 CTSS-／一ApoE一／一 小鼠的腹腔巨噬细胞，以0．1~mol／L的AngII刺激 12h，采 MMP-9表达的影响，为研究参与 AAA形成的两大 用酶联免疫吸附法(ELISA)观察细胞上清液中MMP-9的蛋 蛋 白酶家族间的关系奠定理论基础。 、 白表达。结果 CatS敲除后小鼠AAA的MMP一9的蛋 白表 1 材料与方法 达显著减少(P<0．05)；CatS敲除后小鼠巨噬细胞 MMP一9 的蛋 白表达显著减少 (P<0．05)。结论 CatS可能通过减 1．1 材料 少小 鼠AAA病变和巨噬细胞的MMP-9分泌参与小 鼠AAA 1．1．1 实验动物 选取 SPF级雄性 ApoE-／一小 鼠 的发病过程。 和CatS、ApoE双敲除小鼠各 10只，10周龄，体重 关键词 腹主动脉瘤；组织蛋白酶 S；基质金属蛋白酶-9 18～22g。ApoE-／．小鼠购 自北京维通利华实验动 中图分类号 R543．5 物有限公司，CTSS-／．ApoE．／．小鼠由哈佛大学施国 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2013)04—0365—04 平教授赠送。 目前认为腹主动脉瘤 (abdominalao~icaneu— 1．1．2 主要试剂和仪器 皮下微量泵 (mini—osmot— icpumps)购 自美 国Alzet公司；AngII购 自美国Sig— rysm，AAA)是炎症、动脉粥样硬化、遗传、氧化应激 ma公司；DMEM培养液购 自美 国Invitrogen公司； 等因素共同作用的结果，主动脉中层弹力纤维断裂 10％胎牛血清购 自美 国Gibco公司；10％小牛血清 是其显著特点，细胞外基质重塑是AAA的基本病理 购 自美国Hyclone公司。采用免疫组