实验十三、霉菌形态观察.ppt

霉菌的形态观察 目的要求 学习并掌握观察霉菌形态的基本方法 了解四类常见霉菌的基本形态特征 霉菌 霉菌是丝状真菌，可产生复杂分枝的菌丝体； 菌丝体分为基内菌丝体和气生菌丝体； 气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝； 繁殖菌丝产生孢子； 霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据； 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10μm),常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此用低倍镜即可观察。 霉菌的培养特征 菌落特征：霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，多呈绒毛状、絮状或网状等，菌体可沿培养基表面蔓延生长，由于不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈红、黄、绿、青绿、青灰、黑、白、灰等多种颜色。 霉菌菌丝 有隔菌丝 无隔菌丝 基本原理 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：(a)细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；(c)溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。 为了观察霉菌清晰、完整、保持自然状态的形态，可利用玻璃纸透析培养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察。 毛霉 菌丝无隔 无性生殖：孢囊孢子 有性生殖：接合孢子 无囊托，有囊领 无假根 根霉 菌丝无隔 无性生殖：孢囊孢子 有性生殖：接合孢子 有囊托 有假根 曲霉 菌丝有隔 无性生殖：分生孢子 有性生殖：暂未发现 分生孢子梗：头状 足细胞 青霉 菌丝有隔 无性生殖：分生孢子 有性生殖：暂未发现 分生孢子梗：分支状 材 料 菌种 培养基 PDA培养基 溶液或试剂 乳酸石炭酸棉蓝染色液 仪器或其他用具 操作步骤 水浸片观察法 玻璃纸法 观察要求 先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜； 注意观察菌丝有无隔膜； 有无假根、足细胞等特殊形态的菌丝； 注意其无性繁殖器官的形状和构造； 孢子着生的方式和孢子的形态、大小等。 水浸片观察法 在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液或蒸馏水，用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的霉菌菌丝，用50%的乙醇浸润，再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片），先用低倍镜，必要时转换高倍镜镜检并记录观察结果。 玻璃纸观察法 玻璃纸的选择与处理? 要选择能够允许营养物质透过的玻璃纸。也可收集商品包装用的玻璃纸，加水煮沸，然后用冷水冲洗。经此处理后的玻璃纸若变硬，必定是不可用的，只有那些软的可用。将那些可用的玻璃纸剪成适当大小，用水浸湿后，夹于旧报纸中，然后一起放入平皿内121℃灭菌30min备用。 菌种的培养? 按无菌操作法，倒平板，冷凝后用灭菌的镊子夹取无菌玻璃纸贴附于平板上，再用接种环沾取少许霉菌孢子，在玻璃纸上方轻轻抖落于纸上。然后将平板置28—30℃下培养3—5天，曲霉菌和青霉菌即可在玻璃纸上长出单个菌落（根霉菌的气生性强，形成的菌落铺满整个平板）。 制片与观察? 剪取玻璃纸透析法培养3—4天后长有菌丝和孢子的玻璃纸一小块，先放在50%乙醇中浸一下，洗掉脱落下来的孢子，并赶走菌体上的气泡，然后正面向上贴附于干净载玻片上，滴加1—2滴乳酸石炭酸棉蓝液，小心地盖上盖玻片（注意不要产生气泡），且不要移动盖玻片，以免搞乱菌丝。 无隔菌丝 有隔菌丝 毛霉与根霉 青霉 曲霉 水生态工程实验室－YJH 实验十三、霉菌的形态观察 分生孢子 分生孢子梗 小梗 梗基 副枝 水生态工程实验室－YJH 实验十三、霉菌的形态观察