脑缺血模型讲义20090505.docVIP

线栓法局灶性大鼠脑缺血-再灌模型的制备 （The intraluminal thread model of middle cerebral artery occlusion (MCAO)） 【实验目的】 掌握线栓法制备局灶性大鼠脑缺血-再灌注模型的方法。了解影响模型成功的的某些因素。 【实验原理】 图1 大鼠局灶性脑缺血-再灌模型示意图 建立脑缺血动物模型是开展脑缺血损伤和治疗研究的基础,模型制方法较多,（the intraluminal thread model of middle cerebral artery occlusion，MCAO）（ICA）（VA） ICA，前行至前交通动脉，阻塞大脑中动脉起始部及对侧血供。TTC 显示CP与背外侧皮质为典型缺血改变。此模型优点在于：无需开颅，操作简单，动物损伤小。有明确行为学和病理指标，适于进行运动功能和形态学观察研究。梗死灶确切，重复性好，利于进行各种相关性研究。可在无需再次麻醉时拔出栓线进行再灌研究。现已被广泛应用于制备局灶性脑缺血模型。MCAO法难度大,模型成功率 【实验动物】动物：体重 250-300g，SD 雄性大鼠 8-10只。 【实验器材】 75%酒精、4%水合氯醛（或戊巴比妥钠）、1% 肝素、氯化三苯基四氮唑（triphenylte razoliumchloride ,TTC）PBS、0.28mm）、粗剪刀、手术刀、止血钳、眼科剪、眼科弯镊、外科剪、外科镊，玻璃分针，医用干棉球或纱布块、5ml注射器、酒精灯、石蜡、烧杯、平皿、毛细滴管、剃须刀片、角针、弯盘、自制拉钩ml/100g），背位固定后颈部剪毛消毒，取颈正中切口，钝性分离右颈总动脉（CCA），颈内动脉（ICA）和颈外动脉（ECA）并挂线备用，结扎ECA和CCA，用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于CCA上做一切口，从切口插入上述备好的鱼线，线插入ICA后，打开夹闭ICA的动脉夹，轻柔送线接近18mm处（分叉处到大脑中动脉的解剖），有阻力则止，固定栓线，3h后轻拔鱼线，扎紧ICA，缝合皮肤。假手术组栓线仅送入1cm，其余操作同模型组。 3.神经功能缺陷评分 参考Longa及Bederson的5分制法在动物麻醉清醒后24h进行评分。 追尾征 强迫性体态 图2 大鼠局灶性脑缺血-再灌模型后的追尾征和强迫性体态 0分：无神经损伤症状；1分：不能完全伸展对侧前爪；2分：向对侧转圈；3分：向对侧倾倒；4分：不能自发行走，意识丧失。分值越高，说明动物行为障碍越严重。症状2-3分的死亡率高，1-2分的死亡率低，有的大鼠第二天或几天后可无明显症状，但取脑后还是有梗死灶的。.TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）染色2%ＴＴＣ说明：（1）鱼线选择是关键，根据大鼠重量（的多了后根据动脉粗细就可选择了）选鱼线。经验是：250g以下的选0.26mm的线，250-300g的选0.28。（2）如果遇到鱼线怎么也查不进去的情况，可让大鼠休息一会，换细点的鱼线再试，这种情况不一定都是进到翼腭动脉了，解剖过4例这种情况的大鼠，有三例颅卡住了。（3）通过实践，认为结扎或夹闭翼腭动脉没有必要，按方法，熟练的话，从切开到缝合完毕也就是分钟，算上准备工作（如麻醉、消毒等）半小时。（4）我们体会最好用蘸腊的鱼线作模型，好处是进线深度控制的好，不容易出现蛛网膜下腔出血。 2