人类染色体显微切割,PCR,微克隆技术及其应用.pdfVIP

湖南医科大学学报 ( ) 　1998, 23 2 BULL. O F HUNAN M ED. UN IV. 115 人类染色体显微切割, PCR , 微克隆 技术及其应用 黄　蕾　阮庆国　戴和平　徐　磊　邓汉湘　夏家辉 ( 医学遗传学国家重点实验室　长沙　410078) 关键词　染色体, 人; 　显微切割; 　聚合酶链式反应; 　探针池; 　微克隆技术 中国图书分类号　 343 Q 　　染色体显微切割, PCR , 微克隆技术是细胞遗传学 体进行体外酶促扩增及基因克隆, 从而使上述问题获 与分子遗传学相结合的产物, 经过十几年的发展已日 得解决, 并且连接反应的特异性更高、更有效, 整体显 趋完善, 特别是 技术的介入使整个操作过程变得 微切割、 和微克隆的过程变得简单、快速而高 PCR PCR 简单和实用。早在 60 年代 即已介绍一系列显 [7 ] Edstrom 效 。 [1 ] 微镜下的操作技术 , 为现在的显微镜下超微量的生化 本文就我室所建立的人类染色体显微切割、 PCR 反应奠定了技术基础。 1981 年欧洲分子生物学实验室 和微克隆技术及其应用作一详细介绍。 (EM BL ) Edstrom 领导的小组切取了果蝇的X 染色体 1　人类染色体显微切割、 及微克隆技术[8 ] PCR [2 ] 的第 3 区段, 并成功地进行了克隆 ; 1985 年, F isher 等运用显微切割方法对小鼠X 染色体的近侧区进行了 11　染色体标本的制作 [3 ] 克隆 ; 1986 年, Bate 等做了人类第 2 号染色体短臂的 111　显微切割染色体标本的制备　取 EB 病毒转化 [4 ] 显微切割和克隆 ; 1987 年, Kaiser 等用显微切割的方 淋巴样细胞株悬液用胸腺嘧啶同步, 经秋水仙素处理 [5 ] 法对人类第 7 号染色体长臂的末端区域进行了研究 , 和甲醇: 冰醋酸固定后制片, 用胰蛋白酶溶液按常规 从此显微切割及微克隆技术迅速地发展起来。 GT G 显带。 显微切割技术最初运用于人类染色体时切割的效