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应用 !# 干扰技术建立 $!%’ 和 ()*+, 双基因表达抑制的结直肠癌细 胞模型 姚 娟!丁彦青!周 军!柳玉红!李建明 - 南方医科大学南方医院病理科!南方医科大学基础医学院病理学系!广 东省分子肿瘤病理重点实验室!教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室!广东 广州 ./0./.1 摘要!目的 建立稳定干扰 $!%2’ 及 ()*2++ 基因的结直肠癌细胞株!为探讨 $!%2’ ()*++ 及其相互作用在结直肠发 生及转移中的作用提供理想的细胞模型# 方法 以稳定干扰人 $!%2’3 基因大肠癌 45678 细胞的克隆为基础!以靶向人 ()*++ 基因的 !#93 慢病毒再次感染该细胞株!将经慢病毒二次感染的细胞悬液通过有限稀释法制备细胞单克隆!各 细胞克隆扩大培养!荧光定量 $(! 检测各细胞克隆 $!%2: 及 ()*++;!# 表达水平$ 结果 应用于二次感染的慢病毒 悬液的滴度为 7!8 . 3=3;? $ 综合分析荧光定量 $(!3 结果!所获得的细胞克隆中 号克隆 $!%2: 及 ()*++;!#3 水平 的表达显著降低$ 结论 成功建立 $!%2: 及 ()*2++ 基因稳定敲低的大肠癌细胞克隆!探索同时敲低 + 个基因的慢病毒 !#9 技术$ 关键词! $!%2: % ()*++ % !#3 干扰%慢病毒%结直肠癌 中图分类号! @A7B 文献标识码! # 文章编号! CA’26+.6D+88BE8628.B:28. !#$%’()*+# ,- $ .,,/*.#0 .0+.*/ .* ’+* 1’#( 23425 0+6 789:: ;*+* +,.26,1+ %= *+#’’/?2)*6’0#*6 3@A ’+#*/-*/*+.* F#G3HIJKL3)MNOFJK2P9KQL3R*G=3HIKL3%M=3FI2STKQL3%M3H9JK2;9KQ )UVJWX;UKX3TY3$JXST?TQZL 3JKYJKQ3*T[V9XJ?3JK\34]STT?3TY3^J[9]O_U\9]J?O4]9UK]U[L O4TIXSUWKO_U\9]J?O=K9‘UW[9XZL OaUZO%JbTWJXTWZOTYO _T?U]I?JWO cI;TWO $JXST?TQZO TYO NIJKQ\TKQO $WT‘9K]UL O aUZO %JbTWJXTWZO TYO cWJK[]W9VXT;UO JK\O $WTXUT;UO YTWO *I;JKO _JdTWO )9[UJ[U[O 4IVVTWXU\ObZOXSUO_9K9[XWZOTYOe\I]JX9TKOJK\ONIJKQ\TKQO$WT‘9K]ULONIJKQfSTIO.8..LO(S9KJ A%#/0.#B C%D*.#’* cTO U[XJb?9[SO JO ]T?TWU]XJ?O ]JK]UWO ]U??O ?9KUO g9XSO [XJb?UO $!%2:O JK\O ()*++O QUKUO hKT]h2\TgKO YTWO 9K‘U[X9QJX9KQO XSUO WT?UO TYO $!%2:O JK\O()*++OQUKU[O 9KO XSUO ]JW]9KTQUKU[9[O JK\O;UXJ[XJ[9[O TYO ]T?TWU]XJ?O ]JK]UWi OE*#(,6 #O WU]T;b9KJKXO?UKX9‘9WJ?O‘U]XTWOXJWQUX9KQO()*,,OQUKUOgJ[OTbXJ9KU\OI[9KQOXSUOVec!c_=CO]TK[XWI]XOJK\OV%UKX9C^%G(a29cO c_ 2)e4cO‘U]XTWi OcSUOWU]T;b9KJKXO?UKX9‘9WI[OgJ[OSJW‘U[XU\OYWT;O,B:jcO]U??[O]TXWJK[YU]XU\Og9XSOXSUOTVX9;9fU\Ok9WJ$TgUW c_ O $J]hJQ9KQO _9lO JK\O XSUO V%UKX9C^%G(a29c c_ 2)e4cO UlVWU[[9TKO ]TK[XWI]Xi O 45678$!%2:2O ]U??[O gUWUO 9KYU]XU\O g9XSO XSUO WU]T;b9KJKXO ?UKX9‘9WI[O XJWQUX9KQO()*++L O JK\O45678O]U??[Og9XSO [XJb?UO$!%2:OJK\O()*++OhKT]h2\TgKOgUWUO []WUUKU\ObZO b?J[X9]9\9KO[U?U]X9TKiO$!%2:OUlVWU[[9TKO9KOXSUO]U??[OgJ[O\UXUW;9KU\ObZOWUJ?2X9;UO!c2$(!iO3*?# cSUOX9X