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技术与方法CRISPRCas9技术构建CreERT2定点敲入Isl1基因
中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2015, 37(10): 1406–1413 DOI: 10.11844/cjcb.2015.10.0184
技术与方法
利用CRISPR/Cas9技术构建CreERT2定点敲入Isl1
基因小鼠模型及分析
1,2 1 1 1 1,3*
报
周云鹤 顾晓雯 杨 桦 黄丹丹 费 俭
1 2
( 同济大学生命科学与技术学院, 上海 200092; 同济大学体育教学部, 上海 200092;
3上海南方模式生物研究中心, 上海 200092)
摘要 心肌祖细胞增殖和分化是心脏损伤后修复再生的基础, 而Isl1被认为是心肌祖细胞的特
学
+
异性标志。为了研究以及示踪Isl1 心肌祖细胞及其分化后代, 该文尝试利用成簇规律间隔短回文重复
CreERT2 Isl1 CreERT2
序列CRISPR/Cas9 系统, 将 定点插入到小鼠 内源基因启动子之后, 建立了 基因敲入
小鼠模型。通过与Rosa26-loxP-neo-loxP-lacZ小鼠(Rosa26-lacZ+)交配, 获得Isl1-CreERT(KI)/Rosa26-lacZ+
双杂合小鼠。经过基因型鉴定、组织表达谱测定和X-gal染色、冰冻切片和石蜡切片等方法, 确认基
学
因敲入小鼠的CreERT2表达在成年小鼠心脏窦房结、心脏神经节、主动脉弓和肺动脉根部, 与文献报
道的Isl1表达部位相同。该研究建立的模型可为研究心肌祖细胞的增殖和谱系示踪提供重要的模型。
关键词 CRISPR/Cas9; 心肌祖细胞; Isl1基因; 小鼠模型
物
Construction and Analysis of CreERT2 Knock-in Mouse for Genetic
+
Labling of Isl1 Cardiac Progenitor Cells by CRISPR/Cas9 Technology
生
1,2 1 1 1 1,3*
Zhou Yunhe , Gu Xiaowen , Yang Hua , Huang Dandan , Fei Jian
1 2
( School of Life Sciences and Technology, Tongji University,
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