贻贝多糖MPs的制备与纯度、组分鉴定.pdfVIP

翟誉I仃 第三届海洋生物膏技术论坛 2005．08．19-23 贻贝多糖MPs的制备与纯度、组分鉴定 王俊+徐红丽张建鹏刘军华冯伟华奉焦炳华 (第二军医大学生物化学与分子生物学教研室，上海200433) 摘要：目的：分离纯化厚壳贻贝(Mytiluscoruscus)：多糖MPs，并测定其纯度和单糖组分。方 52、 法：用组织匀浆后热水抽提，Sevag法除蛋白，乙醇分级沉淀，再经DEAE—cellulose Sephacryl 粗品行全波段的最大吸收波长光谱扫描、 硫酸一苯酚比色法测定糖含量；经紫外光谱扫描 分析、红外光谱扫描分析、染料结合比色法、HPLC鉴定其纯度，再经硅胶薄层层析、液相 色谱(GC)进行单糖组分分析。结果：经分离纯化获得贻贝多糖纯品多个组分 分，二者比例接近l：1。结论：厚壳贻贝经工艺改进后经HPLC纯化可获得八个纯品组分为 关键词：厚壳贻贝 多糖分离纯化单糖组分 coruscus)碳水化合物含量达13．4％ll】。据文 主产于浙江省嵊山列岛的厚壳贻I贝(Mytilus 献报导，紫贻贝和翡翠贻贝的酶水解提取物具有抗肿瘤、抗氧化、抗凝血、降血压、降血脂、 提高免疫力等作用‘2】，【31，紫贻贝中的抗菌成分，被认为与脂多糖和紫贻贝中的一些因子相关 明，软体动物中含有多种糖胺聚糖哺l。近十年来，动物中的蛋白多糖的糖链部分一一糖胺聚 糖(GAG)I因具有抗凝血、抗肿瘤、降_血．脂、提高免疫力等多种活性【9】，已引起国内外医药 界的广泛关注。就国内而言，研究者从多种海洋动物中分离提取出各种糖胺聚糖进行了广泛 研究，洪鹏志等研究认为【1们，翡翠贻贝中提取的糖胺聚糖在剂量为80mg／kg时，对昆明小鼠 移植性肿瘤S．180的抑瘤率可达52．4％，且有增强免疫力的活性。 为进一步研究贻贝的药用活性物质，构建开发海洋动物多糖药物技术平台及寻找新的药 用资源，我们对东海厚壳贻贝多糖的分离纯化工艺进行了改进，并对其活性作用及组分结构 进行了研究。 1实验材料与试剂 1．1材料 新鲜东海厚壳贻贝，由浙江省嵊泗市嵊山镇提供，品系经浙江海洋学院赵盛龙教授鉴定 corusus crassitesta 为Mytilus Lischke】。 Gould【Mytilus 通讯作者： +冯伟华Email：fwh402@163．com 313 l建In 第三屠誊洋生镌膏技术论坛 2慨0魄J9-23 1．2试剂 DEAE—cellulose 52，Sephacryl 司)。其他均为国产试剂。 2实验方法m1 2．1样品制备 2．1．1 贻贝多糖粗品MPs的制备 小时，离心去沉淀。提取液浓缩至1000ml，加入Sevag试剂，离心除蛋白。上清液滤膜透析 24h以除去小分子物质。透析液浓缩后加入3倍体积95％乙醇沉淀，过夜，离心除上清，依 次以无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，真空冷冻干燥得到粗品多糖。 2．1．2半纯品MPs．A倡／C制备 NaCI、O．05mol／LNaCl洗脱至无糖液流出吲，流速40ml／h，分部收集，硫酸 以dH20、0．01mol／L S-200柱，以 一苯酚比色法跟踪检测，合并相l司组分得各组分半纯品多糖。另分别上至Sephacryl dH20为洗脱液，流速20ml／h。分部收集，真空冷冻干燥得到进一步纯化的半纯品多糖。 2．1．3纯品MPs．MB／C制备(HPLC) 分析柱为TSK．GELG2000SW，柱长(7．5mmx30cm)，流动相为0．1mol／LNaCJ，上样量 8个单一对称洗脱峰。 2．2纯度与含糖量测定 2．2．1 最大