狂犬病及疫苗(药典)说课.ppt

   狂犬病及疫苗 制作者： 什么是狂犬病？ 狂犬病是被狂犬病病毒感染的一种急性传染病。中枢神经系统是狂犬病病毒复制的主要部位。 人类感染狂犬病几乎全部继发于动物咬伤或抓挠。 世界大部分人类狂犬病的主要宿主是犬，绝大部分人类狂犬病的发生均源于犬咬伤。同时，尽管猫不作为狂犬病病毒的宿主，但也是重要的病毒携带者。 人类狂犬病可以表现为狂躁型或麻痹型。如果是狂躁型狂犬病，患者则在5天内死亡，而麻痹型狂犬病，患者则在13天内死亡。 临床表现为特有的恐水、怕风、恐惧不安、咽肌痉挛、进行性瘫痪等。 病死率100%。 狂犬病病毒是什么样的？ 狂犬病病毒属于弹状病毒科狂犬病病毒属，由一些遗传学相关的包膜病毒组成，含有单股非节段性负链RNA。病毒的形状像一粒子弹，长度为200nm，宽度为75nm。 病毒含有以下五种结构蛋白质：病毒颗粒转录酶（L）、糖蛋白（G）、核蛋白（N）、磷蛋白（P）和基质蛋白（M）。 狂犬病病毒G蛋白是一种三聚体，是诱导生成病毒中和抗体（virus-neutralizing antibodies ，VNAs）的主要抗原，并且可以诱导机体产生对狂犬病病毒致命感染的免疫性。 狂犬病疫苗最重要的免疫应答就是病毒包膜G蛋白相关抗体的产生。 不幸被疯狗咬了如何打疫苗？ “5针法”：美国和WHO推荐的暴露后免疫程序是在第0天应用狂犬病免疫球蛋白（rabies immunoglobulin，RIG），然后分别在第0天、第3天、第7天、第14天和第28天应用CCV；只在三角肌的位置肌内注射1ml疫苗。 “2-1-1”：广泛用于法国，该方案包括在第0天两次肌内注射1ml，然后在第7天和第21天分别各注射一次。使用2-1-1程序可能最好限定于没有咬伤的暴露，以及患者依从性非常差的情况。 “2-2-2-0-2”：前的泰国红十字会免疫方案包括分别在第0天、第3天、第7天和第28天皮内注射两剂0.1ml。 “8-0-4-0-1-1”：用于一些发展中国家， 多部位皮内注射0.1ml，0（8剂）、7（4剂）、28、90 由于肌内注射费用昂贵，为缩减成本可以进行皮内注射。 除了打疫苗，需要联合使用RIG（HRIG或ERIG） 怎样进行暴露前免疫？ 所有可能接触狂犬病病毒的高风险职业，如兽医、猎人、设陷阱捕兽者、抓犬员、邮件投递者、业余洞窟探勘者和实验室工作人员均应预防性接种狂犬病疫苗。 标准美国三剂注射方案：肌内注射，0、7、21或28。 接受3剂暴露前免疫方案之后，在实验室中持续暴露于高浓度狂犬病病毒的人员应每6个月检测一次VNA水平，如果滴度不足，则应肌内或皮内注射一支疫苗以加强。兽医和其他经常暴露于狂犬病动物或狂犬病病毒的人员同样应每2年检测一次。 细胞培养狂犬病疫苗（cell culture rabies vaccines ，CCV） 人二倍体细胞疫苗（可以避免对动物蛋白的过敏）——MRC-5人胚成纤维细胞 Vero 细胞疫苗——Vero的传代非洲绿猴肾细胞 纯化的鸡胚细胞培养疫苗——原代鸡胚成纤维细胞 原代地鼠肾细胞培养疫苗——乳鼠肾细胞系（BHK-21） 纯化鸭胚细胞培养疫苗——鸭胚 恒河猴二倍体细胞培养疫苗——恒河猴胚肺成纤维细胞 什么是疫苗？ 疫苗是以病原微生物或其组成成分、代谢产物为起始材料，采用生物技术制备而成，用于预防、治疗人类相应疾病的生物制品。 类型：灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、 基因工程重组蛋白疫苗、其他类疫苗 灭活疫苗:是指病原微生物经培养、繁殖，用理化方法灭活后制成的疫苗。Eg:狂犬病疫苗 如何制造狂犬病疫苗？ 狂犬病病毒毒株接种人二倍体细胞,培养后,收获病毒液,浓缩后，灭活病毒，而后纯化制成。 前期工作：建立种子批系统 原始种子/细胞种子 传代扩增至特定代次 主种子批/主细胞库 工作种子批/工作细胞库 传代扩增至特定代次 ☆保管菌毒种要有严格的登记制度，建立详细的总账和分类账。 ☆种子批的检定项目至少应包括鉴别（血清学、全病毒或部分特征性序列测序）、外源因子、病毒表型、遗传稳定性等。 目的：保证疫苗生产的一致性。 病毒性疫苗生产用细胞基质 选择疫苗生产用细胞基质应基于风险效益的综合评估，包括细胞的种属及组织来源、细胞对病毒的敏感性、扩增病毒的稳定性、细胞的特性及全面检定的可行性、细胞对制品的安全性、生产工艺的便利性以及下游纯化工艺能够去除风险因素的可能性和达到的安全水平等。 疫苗生产用细胞基质通常包括原代细胞、二倍体细胞和连续传代细胞。 人二倍体细胞（MRC-5） 细胞检定：①细胞鉴别②外源因子③內源因子④成瘤性⑤致瘤性 生产用培养液 病毒疫苗生产用细