量子点探针技术在肝癌、乳腺癌分子靶向诊断中的应用研究.pdfVIP

第一届全闺纳米材料与结构检测与表征研讨会(摘要，论文集) 宁波2帅8年7月2日-3日 量子点探针技术在肝癌，乳腺癌分子靶向诊断中的应用研究 陈创1、陈良冬1、彭俊2、刘佳2、夏和顺3、杨桂芳4、吴琼水5、张志凌2、庞代文2一、李雁。★ (1武汉大学中南医院肿瘤科、湖北省肿瘤医学临床研究中心、肿瘤生物学行为湖北省重 点实验室、武汉大学肿瘤防治研究中心，湖北武汉430071，liyansd@yahoo．com) (2武汉大学化学与分子科学学院，湖北武汉430072，dwpang@whu．edu．cn) (3湖北省肿瘤医院病理科，湖北武汉430079) (4武汉大学中南医院病理科，湖北武汉430071) (5武汉大学科学仪器工程技术中心，湖北武汉430072) I摘要l 癌症是影响人类生存的重大疾病，已成为我国居民的首位致死病因。分子靶向诊断 和治疗在肿瘤诊疗中发挥着重要作用，肿瘤标志物是分子靶向诊断与治疗的前提，具有 重要临床应用价值，但目前对肿瘤标志物的诊断敏感性有限，且缺乏有效的监测与临床 应用平台。新型半导体荧光纳米晶粒量子点(Quantum dots，QDs)具有优良的发光特 性，可将其作为标记物与肿瘤标志物结合构建纳米生物探针，在肿瘤诊疗及监测中发挥 重要作用，临床应用前景广阔。 肝癌是严重危害我国人民健康的最常见恶性肿瘤之一，恶性度极高，其中癌的侵袭 和转移是阻碍疗效进一步提高的主要障碍，因此建立有效的侵袭转移诊断监测系统是提 高疗效的关键。我们应用量子点标记技术对人肝癌自发性肺转移裸小鼠模型进行了体内 外分子靶向诊断研究。用AFP单克隆抗体作为一抗，巯基乙酸修饰的水溶性CdSe／ZnS核 壳型QDs与相应二抗结合制备成QDs．IgG探针，实现了对体外培养高表达甲胎蛋白( alpha．fetoprotein，AFP)的人肝癌细胞株HccLM6的特异性免疫荧光成像(图1)。随 后，又进行了实时、动态分子靶向体内诊断技术研究。将体外培养的肝癌细胞株 HcCLM6通过皮下接种和尾静脉注射裸鼠分别建立人肝癌裸鼠模型和肺转移模型，将量 子点直接与抗AFP单克隆抗体结合成功制备了水溶性QD—AFP．Ab复合物探针，通过尾静 脉注入肝癌裸鼠模型体内，实现了对肿瘤的非损伤性在体靶向成像(图2)，此外，对 QDs标记探针在肿瘤部位分布的进一步研究表明，QDs荧光在肿瘤内呈非均一性分布， 总体呈现出肿瘤外周强，中心弱的特点，说明肿瘤不同部位的增殖活跃程度不同(图 3)。这些结果均表明，QD．AFP．Ab靶向探针不仅能特异性靶向肿瘤部位，还能通过荧 光强度的强弱反映肿瘤不同部位增殖的活跃程度，灵敏度较高，这将有助于肝癌早期转 移的诊断、治疗及监测研究。 我们还发现，量子点标记探针的生物相容性好，未对裸鼠产生明显急性毒性反应， 但长期潜在毒性尚有待研究。量子点的潜在毒性使其在短期内难以用于体内临床研究。 因此体外诊断是目前临床应用研究的重点，特别是在病理学方面，其中对乳腺癌分子标 志物的研究是目前研究的热点。 我们应用链霉亲和素修饰的量子点探针，对乳腺癌的重要分子标志物人类表皮生长 因子受体．2(human epidermal growth factorreceptor 2，HER2)进行了临床检测研究。 HER2对乳腺癌预后判断、治疗选择具有重要作用，准确检测非常重要，而确立标准的 23 第—届全国纳米材料与结构检测与表征研讨会(摘要／论文集) 宁波20吣年7月2日一3日 HER2检测手段和判别标准则是准确检测的关键。目前，临床上最常用的检测方法是检 测蛋白表达的免疫组织化学(Immunohistochemistry，IHC) (图4B和5B)和基因扩增检 测的荧光原位杂交(Fluorescence加．s打“hybridization，FISH)法(图5E和F)，前者是临 床上应用最广泛的检测技术，但该技术存在影响因素较多、敏感性有限、实验室间差异 较大、结果判断主观性等不足；而FISH虽然是目前HER2检测的“金标准”，但该检测技术 操作复杂、费时、费力、价格昂贵、实验条件要求较高、专业性较强而难以普及；此 外，这两种方法均为半定量检测方法，难以实现临床个体化治疗，而量子点标记探针技 术有望弥补这些不足。 我们首先利用该类探针，与临床现有的IHC体系相结合，成功实现了对乳腺癌石蜡 切片组织中HER2的特异性检测(图4A．D)。随后，我们从700例行HER2IHC检测的临床 乳腺癌标本中，随机选择IHC各强度(O、+、2+、3+)的54例浸润性导管癌标本进行 了再次验证。结果表明，该体系的重复性好，检测敏感性高，结果容易判读(图5A和 B)。同时，我们也专门开发出了一套针对该体系的结果分析系统，将量子点荧光与组 织自发荧光进行分离(图4E和