第05章节代谢物酶法剖析的技术.pptVIP

酶活性恢复法应用举例 丙酮酸激酶法或色氨酸酶法测定钾离子 α-半乳糖苷酶法测定钠离子 淀粉酶法测定氯离子 超氧化物歧化酶法测定铜离子 碳酸酐酶或碱性磷酸酶法测定锌离子等 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 激活和抑制法 有机磷是乙酰胆碱酯酶的抑制剂，用标准乙酰胆碱酯酶与标本在37℃水浴10min，测定剩余的乙酰胆碱酯酶的活性，被抑制的乙酰胆碱酯酶的活性可以计算出标本中有机磷的含量。 有机磷的酶法测定 根据酶有否激活剂和抑制剂存在时酶促反应动力学发生改变来测定激活剂和抑制剂的含量。 另有抑制ALP法测定茶碱、激活HK法测定镁离子等。 返回章目录 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 试剂酶质量 试剂酶概念 试剂酶特征 试剂酶纯度 酶法设计要求 酶法设计共性要求 平衡法设计的要求 速率法设计的要求 代谢物酶法分析的设计要求 3 试剂酶来源 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 试剂酶是指作为诊断试剂来测定化合物浓度或酶活性的一类酶。它是酶试剂的核心，它的质量是酶试剂质量的决定性因素。 试剂酶的质量要求 (1) 试剂酶的概念 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 主要来自动植物组织提取及微生物发酵工程。基因重组酶蛋白也有应用，活力高，杂酶含量少且价格低廉。 不同来源的同一种试剂酶有不同的理化特征。必须掌握专一性和分子量、等电点、Km、最适pH，最适温度等，并熟悉辅助因子、激活剂和抑制剂对酶活性的影响。 试剂酶的来源和理化特征 试剂酶的质量要求 (1) Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 不同的酶试剂系统对试剂酶的纯度有不同的要求。以NAD(P)H为指示反应中，要求试剂酶有较高的纯度。而在Trinder反应中要求相对低一些。 纯度主要指标 ①酶的比活性，酶的比活性越高，酶的纯度越高。②杂酶含量，容易引起副反应的一些酶含量按 “允许限度”的要求（见表5-2）。 试剂酶的质量要求 (1) 试剂酶的纯度要求 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 表5-2常用试剂酶的理化特征及质量要求 名称 葡萄糖氧化酶（GOD） 己糖激酶(HK) 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH) 过氧化物酶(POD) 来源 A.niger p.notatum 酵母 酵母 辣根 分子量 186000 152000 105000 212000 40200 等电点 4.30 4.50-4.80 4.50 7.20 比活性 (U/mg) ＞20 ＞140 ＞140 ＞50 杂酶占试剂酶活性的%（允许限度） 蔗糖酶含量＜0.01%,过氧化氢酶＜10U/mg蛋白 磷酸葡萄糖异构酶＜0.01%,G-6-P脱氢酶＜0.01% 己糖激酶、磷酸葡萄糖异构酶＜0.02% 不含胺氧化酶及过氧化氢酶 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 名称 脲酶 谷氨酸脱氢酶(GLDH) 乳酸脱氢酶 脂蛋白脂肪酶（LPL） 甘油激酶（GK) 来源 巨豆 变形杆菌 心 心，假单胞菌属 嗜热脂肪芽胞杆菌 分子量 483 000 300 000 135 000 47 000 209 000 等电点 4.90 4.60 4.5-