基因工程的操作精选.ppt

练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA连接酶作用于 处。（填“a”或“b”） 练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术的核心是 和 。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 A C 基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 A、人工合成目的基因 B、目的基因的检测和表达 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因与运载体结合 （多选）人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生产人类胰岛素，这一过程涉及到 A.用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接 B.把重组后的DNA分子导入受体细菌内进行扩增 C.检测重组DNA分子是否导入受体细菌内并表达出性状 D.筛选出能产生胰岛素的“工程菌” ABCD 培养 培养 培养 导入 含目的基因的重组质粒导入大肠杆菌 含有氨苄青霉素 的完全培养基 含有四环素的完全培养基 两种培养基均不能生长大肠杆菌 Ca2+ 处理细胞形成感受态细胞 检测 （培养不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性积基因的大肠杆菌） 只有氨苄青霉素抗性基因质粒 只具有氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌 不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性积基因的大肠杆菌 完全培养基 导入 接种培养 接种培养 接种培养 含有四环素的完全培养基 完全培养基 大肠杆菌不含抗四环素基因 证明： 不存活 含有四环素的完全培养基 证明： 大肠杆菌的受体细胞含有目的基因 四环素抗性基因 四环素抗性基因 存活 如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ 存活 导入 接种培养 接种培养 接种培养 接种培养 含有四环素的完全培养基 完全培养基 大肠杆菌不含抗四环素基因 证明： 不存活 含有四环素的完全培养基 证明： 大肠杆菌含抗四环素基因 证明： 大肠杆菌的受体细胞含有目的基因 四环素抗性基因 四环素抗性基因 完全培养基 存活 如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ * 目的基因 二、基因表达载体的构建 ——基因工程的核心 1、目的： 所需物质： a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 2、基因表达载体的组成： 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 它们各自的作用是什么? 2.基因表达载体的组成： 它们所处的位置和有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 注意 常用的受体细胞： 原核生物：大肠杆菌、 枯草杆菌 、土壤农杆菌 真核生物：酵母菌和动植物细胞 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 将目的基因导入受体细胞 转化： 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表