基因工程的基本操作精选.ppt

③根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 优点 缺点 鸟枪法 反转录法 根据已知氨基酸合成DNA法 操作简便广泛使用 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因 专一性强 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性最强 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ 、 ___________. ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 专题1 基因工程 1.DNA的分子结构 ⑴基本组成元素： C H O N P ⑵基本组成物质： ⑶基本结构单位： 4种脱氧核糖核苷酸 脱氧核糖 + 含氮 碱基 + 磷酸 ⑷一级结构： 脱氧核苷酸链 ⑸空间结构： DNA双螺旋结构 ● DNA分子的结构 腺嘌呤脱氧核糖核苷酸（A） 鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸（G） 胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸（T） 胞嘧啶脱氧核糖核苷酸（C） 2.DNA双螺旋结构特点 一个DNA含有两条多核苷酸链，多核苷酸链是由很多个核苷酸聚合而成；两条多核苷酸链反向平行；脱氧核糖与磷酸交替连接，形成DNA分子多核苷酸链的骨架，排列在外侧，碱基排列在内测；DNA分子两条链上的碱基，遵循一定的规律形成碱基对，碱基对之间通过氢键连接。 A G C T DNA分子的平面结构 氢键 A T G C A A T T G C C T T A A G 基础知识梳理 一、基因的概念、载体及功能 基础知识梳理 3．染色体、DNA、基因的数目关系 (1)一般来说，每条染色体上含一个DNA分子。 (2)每个DNA分子上有很多个基因。 (3)每个基因中又含有成百上千个 。 脱氧核苷酸 一、有关概念间的相互关系 1．脱氧核苷酸、基因、DNA、染色体之间的关系 基础知识梳理 二、基因控制蛋白质的合成 1．合成过程 一、基因工程诞生的基础 20世纪中叶，基础理论取得了重大突破 1.DNA是遗传物质的证明 2.DNA双螺旋结构和中心法则的确立 3.遗传密码的破译 技术发明使基因工程的实施成为可能： 1.基因转移载体的发现 2.工具酶的发现 3.DNA合成和测序技术的发明 4.DNA体外重组的实现 5.重组DNA表达实验的成功 6.第一例转基因动物问世 7.PCR技术的发明 基础知识梳理 四、中心法则 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的生物类型和生物产品。 二、基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的生物类型和生物产品 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基本工具： 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 三、 DNA重组技术的基本工具 1.基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） 限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一种酶，能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。 特点：特异性。 即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） 限制酶 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时