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多孔动物细胞培养板 * 动物细胞融合和单克隆抗体 学习目标 了解细胞融合的原理、过程和意义 理解单克隆抗体制备的过程和应用 重点难点 1.学习重点： 单克隆抗体的制备和应用 2.学习难点： 单克隆抗体的制备过程 温故而知新——植物细胞杂交（马铃薯番茄） 融合的原生质体AB 再生出细胞壁 植物细胞的融合 杂种细胞AB 杂种植株 脱分化 愈伤组织 再分化 植物组织培养 原生质体B 原生质体A 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 植物细胞A 植物细胞B 三、动物细胞融合 1.概念： 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的单核细胞，称为杂交细胞。 2、基本原理： 细胞膜的流动性 (植物原生质体融合) 物理法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激、振动、离心 聚乙二醇（PEG） 例如：仙台病毒 3、诱导方式 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 生物法： 灭活的病毒 （丧失感染性、保留抗原结构） ４.过程： 比较 项目 原理 细胞融合的方法 诱导手段 用途 植物 体细 胞杂 交 纤维素酶、 果胶酶去除 细胞壁后诱 导原生质体 融合 离心、 电激、 振动、 聚乙二醇 克服远源 杂交不亲 和，获得 杂种植株 动物 细胞 融合 用胰蛋白酶 使细胞分散 后诱导细胞 融合 除应用植物 细胞杂交手 段外，还有 灭活的病毒 获得杂 种细胞、制备单 克隆抗体 细胞膜的 流动性和植物细胞全能性 细胞膜的流动性 比较植物体细胞杂交、动物细胞融合 抗体由什么细胞产生？ 其化学本质是什么？ 主要分布在哪里？ 　１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体。 　２．动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 　３．但每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。　 　４、在体外，一个Ｂ淋巴细胞是不可能无限增殖的。　 从血清中分离抗体 该方法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？ １、单克隆抗体McAb（概念） 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 　　那么，如何大量获得化学性质单一、特异性强的抗体？（即单克隆抗体）　 二、单克隆抗体制备 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂种细胞 动物细胞培养技术 ２、设计方案： 动物细胞融合 创始人：米尔斯坦 单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量繁殖 单克隆抗体的制备 思考讨论 1 、注射抗原的目的是什么? 2、单克隆抗体制备时需选哪两种细胞融合？ 诱导融合方法？ 3、考虑细胞两两融合会有几种融合结果？ 4、如何筛选出杂交瘤细胞？杂交瘤细胞有哪些特点？ 5、选出的杂交瘤细胞都能产生所需的特异性抗体吗？ 6、如何筛选出产生所需的特异性抗体的杂交瘤细胞？ 7、两次筛选的目的各是？ 8、如何培养杂交瘤细胞得到大量的单克隆抗体？ 两种方法的优点？ 9、此过程运用到哪些生物学技术？ 动物细胞融合技术 BB 、B瘤 、瘤瘤 、B 、瘤 只有杂交瘤细胞才能活 动物细胞培养 3.制备过程 获得产生相应抗体的B淋巴细胞 杂交瘤细胞： 即能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体 能产生所需特定抗体 的杂交瘤细胞 培养条件简单，无需配置培养液 能在短时间内产生大量的单克隆抗体 骨髓瘤细胞 注射抗原 单克隆抗体 筛选 筛选 体内培养 体外培养 已免疫的 B淋巴细胞 细胞融合 杂交细胞 能产生特定所需抗体的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞 请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 多孔动物细胞培养板 *