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第二章 菌种分离及选育 第一节 菌种的分离纯化 筛选分离步骤： 样品采集 样品预处理 增殖培养 菌种初筛 菌种复筛 性能鉴定 传代稳定性实验 菌株终选 一、样品采集 土壤：分布广泛，特别是一些极端环境，欲筛选活性物质的种类不同，地点也不相同。 水体中：江、河、湖、海 其他：动物、植物等 二、样品预处理 放线菌材料的预处理方法 方法 处理方式 材料 分离菌株 加热：55℃,6min 水、土壤、粪肥 小单孢菌 100℃,1h,40℃,2-6h 水、根土 链霉菌、小双孢菌 物理法 马杜拉菌属 膜过滤法 水 小单孢菌、内孢高温放线菌 离心法 海水 、污泥 链霉菌属 空气搅拌法 发霉的稻草 嗜热放线菌 含1%几丁质培 土壤 链霉菌属 化学法 用CaCO3提高pH培养 土壤 链霉菌属 涂石蜡棒置碳源培养基中 土壤 诺卡氏菌 诱饵法 花粉 土壤 游动放线菌 蛇皮 土壤 小瓶菌属 三、菌种的分离 (一)、选择性压力分离法 选择性压力分离法：利用不同微生物生长繁殖对环境及营养的要求不同，如：温度、pH、渗透压、氧气、碳源、氮源及其他特殊条件，使其利于某类或某种微生物的生长而不利于其他种类微生物的生存，以使目的菌占优势而得以分离出来的方法。 1、分离不同微生物采用不同的培养基或培养条件 用于选择性分离放线菌的几种培养基 培养基 占优势的菌株 含胶态几丁质、矿物盐 链霉菌属、微孢菌属 基质减半的营养琼脂培养基 嗜热放线菌 葡萄糖、天冬酰胺 马杜拉放线菌、小双孢菌 2、恒化式富集培养技术 (二)、随机分离法 随机分离法：某些微生物的产物对产生菌的筛选没有任何选择 性好处，常随机地分离所需菌种。 选择准则： 1)制备系列培养基，其中有各类型的养分成为生长限制因素 2)避免使用易同化的C(葡萄糖)或N（NH4+），它们易引起分解代谢物阻遏 3)确定含有所需的辅因子(一些金属离子) 4)加入缓冲液减少pH的变化 1、抗生素产生菌的分离 方法有：抑菌圈法、稀释法、扩散法、生物自显影法等 2、酶抑制剂产生菌的分离 筛选原理：如果某种化合物能在体外抑制某种关键的人体酶，它就可能在体内产生药理作用。一般选择与生理和病理关系明确的酶为靶酶进行筛选。 3、抗肿瘤药物产生菌的分离 1)利用微生物筛选作用于DNA的抗肿瘤药物 生化诱导分析法 2)利用DNA修复能力突变株进行抗肿瘤药物筛选 4、生长因子产生菌的分离 如氨基酸和核酸产生菌 5、抗病毒药物产生菌的分离 检测病毒复制中特有的DNA复制酶和核酸合成酶的酶抑制剂 第二节 菌种选育 一、自然选育 ●方法：将菌种制菌悬液，稀释后分离得单菌落，测其生产能力，选育高水平菌种 ● 特点：简单易行，可纯化菌种，防止退化，稳定产量，偶而可提高产量，效率低。 二、诱变育种 (一)、原理 (二)、诱变育种的基本方法