培养基配制适用性检查标准操作程序.doc

题 目 文件编号 制 定 人 审 核 人 批 准 人 制定日期 年 月 日 审核日期 年 月 日 批准日期 年 月 日 颁发部门 生效日期 分发部门 目的：制定培养基配制、培养基适用性检查的标准操作程序。 范围：适用于微生物实验室培养基的配制和适用性检查。 责任者：微生物检验员 所用器具、仪器、材料、菌种 器具、仪器：高压蒸汽灭菌锅、高温灭菌柜、隔水恒温培养箱、生化培养箱、双人净化操作台、单人净化操作台、干燥箱、恒温水浴锅、电子天平、500ml三角瓶、移液管、培养皿、试管、接种环、酒精灯 材料：标准干燥培养基（购于生物研究所）、待验证培养基 菌种：大肠杆菌CMCC（B） 441021.1.2 配制用水 培养基配制用水应为纯化水，纯化水应临用新配。 1.2 配制 1.2.1 记录所用脱水培养基的品名、批号、生产日期、生产厂家及配制处方。 1.2.2 用分度值为0.01的电子天平准确按处方量进行称量并装入三角瓶内。 1.2.3 用量筒按照培养基处方配比加入纯化水。 1.2.4 用硅胶橡皮塞塞上瓶口，轻轻振摇使充分混匀。 1.2.5 培养基在配置后必须进行PH值的测定，以确保符合药典要求和生产厂家的规定，一般情况下，PH值不能超过规制值±0.2。 1.2.6 用牛皮纸包扎瓶口，贴上标签，注明品名、批号、配置日期、配置人、有效期。 1.3 灭菌 将上述已配制的培养基放入高压蒸汽灭菌锅按培养基灭菌条件进行灭菌（每次配制的培养基应在2小时内进行有效灭菌，否则极易染菌。若未能在2小时内进行有效灭菌，则倒掉重新配制）。若没有具体要求，一般灭菌温度（压力）为121℃（0.1MPa），灭菌时间为20分钟。 灭菌完成后，待高压灭菌锅温度、压强自然下降为“0”值，方可取出灭菌好的培养基（不可未降温时拿出，否则培养基内外会形成负压，易染菌）。 1.4 培养基的保存 1.4.1 贮存条件 待培养基冷却至室温，置洁净的冰箱冷藏室于4℃存放。（不得冻结,否则，融化后常因理化条件改变而不能再用）。 1.4.2 保存时限 基础营养培养基应在2周内用完。 生化鉴别培养基应在1周内用完。 选择性分离鉴别培养基制成平板后应在24小时内用完。 按时间差培养基质量（外观、失水、过期等情况），出现异常应及时处理。质量出现问题的培养基应采取高温灭活处理方式（121℃20分钟）。 1.5 填写培养基配制记录 1.6 培养基的使用4℃存放。 2.1.2 将购买的菌种（从生物研究所购买的菌中味第0代，传代次数不超过5代）从冰箱冷藏室取出，放于菌种接种室复至室温。 2.1.3 将待检查培养基和标准培养基置于水浴锅中融化，于45℃保温备用。 2.1.4 分别将待检查培养基和标准培养基各取约10~15ml倒入试管，试管倾斜放置制成斜面备用。另分别将待检查培养基和标准培养基制备等量平板备用。 2.2 菌种接种 在菌种接种室，用接种环分别挑取适量菌种划线接种于上述斜面培养基上。 2.3 菌液配制 2.3.1 将上述已接种的斜面培养物（大肠菌20~28℃生化培养箱，其他菌种置于30~35℃隔水恒温培养箱中培养24~48小时。另上述培养物用0.9%氯化钠蛋白胨缓冲液制成每1ml含菌数为50~100CFU的菌悬液。 2.3.2 菌液计数：取含大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液各1ml（含活菌数50~100CFU）分别注无菌平皿（每株试验菌制备2个平皿，作为对照），即刻倾注营养琼脂培养基，混匀，待凝固置30~35℃隔水恒温培养箱中培养48小时。沙门菌接种至沙门志贺菌属琼脂培养基30~35℃隔水恒温培养箱中培养48小时。白色念球菌接种至玫瑰红钠培养基，置20~28℃生化培养箱培养72小时。培养后取出计数。 2.4 接种平板 在菌种接种室，分别挑取上述已培养的新鲜菌种划线接种于待检查培养基和标准培养基的平板上。 2.5 观察结果 ，观察并比较各待检查培养基、标准培养基上菌落生长情况（菌落形态、干燥状态、菌落数量等）。分别挑取上述待检查培养基、标准培养基平板上的同种菌落进行镜检，观察同种菌落在不同培养基的形态、色泽是否一致。若一致判定该培养基的适用性符合规定。 2.6 回收率的计算 计算公式： 回收率%=待检查培养基平板的平均菌落数×100% 标准培养基平均菌落数 2.7 结论 镜检结果若一致 且被检培养基上的菌落平均数不小于标准培养基上菌落平均数的70%，则说明待检查培养基与标准培养基都适用于该菌种的培养。否则说明待检查培养基不适用于该菌种的培养。 编号： 第 3 页 共 4 页