基于shotgun技术对鹿茸蛋白质组学的初步分析.pdfVIP

基金项目：本研究受吉林省卫生厅科研项目资助（编号： ２０１１Ｚ０９０ ）  通讯作者 文章编号： １００７－４２８７ （ ２０１４ ） ０１－００１８－０４ 基于 ｓｈｏｔ ｇ ｕｎ 技术对鹿茸蛋白质组学的初步分析 魏征人１，陈智嘉１，刘 　 洋１，赵 　 静４，于 　 鸿３，吴 　 荻２，３ （ １． 吉林大学白求恩医学部基础医学院药理学教研室，吉林 长春 １３００２１ ； ２． 吉林大学第一医院肿瘤中心； ３． 吉林省肿瘤医院； ４． 吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室） 摘要：目的 　 利用 Ｓｈｏｔ ｇ ｕｎ 方法分析吉林双阳梅花鹿生长期鹿茸蛋白组分，完善鹿茸蛋白质表达谱的分析。方法 　 先将新鲜鹿茸高速匀浆取上清；硫酸铵沉淀获取鹿茸总蛋白粗提物， ＤＥＡＥ 纯化获取蛋白组分 Ｉ ；行溶液内酶解、毛 细管高效液相色谱方法／质谱 ｓｈｏｔ ｇ ｕｎ 分析，所得数据按照 ＩＰＩ 号对蛋白进行 ＧＯ 功能在线分析。结果 　 鹿茸蛋白组 分 Ｉ 共有 ３８ 个蛋白质，注释蛋白 ３４ 个；其中，高丰度蛋白质 ８ 个；参与生物过程的蛋白质占鹿茸蛋白组分 Ｉ 总量的 ２０．５％ ；参与细胞成分的蛋白质占总量的 ３８．２％ ；参与分子功能的占总量的 ４４．１％ 。鉴定出的蛋白质细胞内外分布 平衡，已知最多的蛋白质为具有结合功能的蛋白质。结论 　 Ｓｈｏｔ ｇ ｕｎ 方法可有效分离和分析鹿茸蛋白质组分，为鹿茸 蛋白组学的研究提供了基础理论数据。 关键词：鹿茸；蛋白质组学； Ｓｈｏｔ ｇ ｕｎ 技术 中图分类号： Ｒ９６５．３ 文献标识码： Ａ Ａ ｐｐ ｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＳｈｏｔ ｇ ｕｎｓｔｒａｔｅ ｇｙ ｏｎ ｐ ｒｏｔｅｏｍｉｃａｎａｌ ｙ ｓｉｓｏｆ ｐ ｉｌｏｓｅｉｎＳｈｕａｎ ｇｙ ａｎ ｇ ｓｉｋａｄｅｅｒ 　 ＷＥＩＺｈｅｎ ｇ ｒｅｎ １ ， ＣＨＥＮＺｈｉ ｊ ｉａ １ ， ＬＩＵＹａｎ ｇ １ ， ｅｔａｌ． （ １．Ｄｅ ｐ ａｒｔｍｅｎｔｏ ｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ ｇｙ ， ＮｏｒｍａｎＢｅｔｈｕｎｅＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅ ｇ ｅ ， ＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔ ｙ ， Ｃｈａｎ ｇ  ｃｈｕｎ１３００２１ ， Ｃｈｉｎａ ； ２．ＴｕｍｏｒＣｅｎｔｅｒｏ ｆ ＦｉｒｓｔＣｌｉｎｉｃａｌＨｏｓ ｐ ｉｔａｌ ， ＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔ ｙ ， Ｃｈａｎ ｇ ｃｈｕｎ１３００２１ ， Ｃｈｉｎａ ； ３．Ｊｉｌｉｎ ｐ ｒｏｖｉｎｃｅＴｕｍｏｒＨｏｓ ｐ ｉｔａｌ ， Ｃｈａｎ ｇ ｃｈｕｎ１３００１２ ， Ｃｈｉｎａ ； ４．Ｋｅ ｙ Ｌａｂ ｆ ｏｒＺｏｏｎｏｓｉｓＲｅｓｅａｒｃｈ ， Ｍｉｎｉｓｔｒ ｙ ｏ ｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ， Ｉｎｓｔｉ ｔｕｔｅｏ ｆ Ｚｏｏｎｏｓｉｓ ， ＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔ ｙ ， Ｃｈａｎ ｇ ｃｈｕｎ１３００６２ ， Ｃｈｉｎａ ） Ａｂｓｔｒａｃｔ ： Ｏｂ ｊ ｅｃｔｉｖｅ 　 Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉ ｇ ａｔｅｔｈｅＳｈｏｔ ｇ ｕｎｓｔｒａｔｅ ｇｙ ｆｏｒｔｈｅａｎａｌ ｙ ｓｉｓｏｆ ｐ ｉｌｏｓｅ ｐ ｒｏｔｅｏｍｅｉｎＳｈｕａｎ ｇｙ ａｎ ｇ ｓｉｋａ ｄｅｅｒ ， ｃｏｍ ｐ ｌｅｔｅｓｔｕｄｉｅｓｉｎｅｘ ｐ ｒｅｓｓｉｏｎ ｐ ｒｏｆｉｌｅｏｆ ｐ ｒｏ ｇ ｒｅｓｓｉｖｅｉｍｍａｔｕｒｅａｎｔｌｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ 　 Ｔｈｅｒａｗｔｉｓｓｕｅｏｆ ｐ ｉｌｏｓｅａｎｔｌｅｒ ｗａｓｈｏｍｏ ｇ ｅｎａｔｅｄｗｉｔｈｈｉ ｇ ｈｓ ｐ ｅｅｄ．Ｔｈｅｔｏｔａｌ ｐ ｒｏｔｅｉｎｅｘｔｒａｃｔｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄａｆｔｅｒａｍｍｏｎｉｕｍｓｕｌｆａｔｅ ｐ ｒｅｃｉ ｐ ｉｔａｔｉｏｎ．ＤＥＡＥ ｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏ ｇ ｅｔ ｐ ｒｏｔｅｉｎｓｏｌｕｔｉｏｎＩｆｒｏｍｒａｗ ｐ ｒｏｔｅｉｎｅｘｔｒａｃｔ．ＰｒｏｔｅｉｎｓｏｌｕｔｉｏｎＩｗａｓｅｘ ｐ ｏｓｅｄｔｏｔｒ ｙｐ ｓｉｎｄｉ ｇ ｅｓｔｉｏｎ． Ｔｈｅｎ ， ｈｉ ｇ ｈ ｐ ｒｅｓｓｕｒｅｌｉ ｑ ｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏ ｇ ｒａ ｐ ｈ ｙ ／ ＭＳｓｔｒａｔｅ ｇｙ ｗａｓｕｓｅｄｆｏｒ ｐ ｒｏｔｅｉｎａｎａｌ ｙ ｓｉｓ．Ａｌｏｆｄａｔａｗｅｒｅａｎａｌ ｙ ｚｅｄｂ ｙ ｕ ｓｉｎ ｇ ｏｆＧＯｓｏｆｔｗａｒｅｏｎｌｉｎｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ 　 Ｂ ｙ ｕｓｉｎ ｇ ｓｈｏｔ ｇ ｕｎ ｐ ｒｏｔｅｏｍｉｃｓａ ｐｐ ｒｏａｃｈ ， ３８ ｐ ｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅ ｐ ｒｏ ｔｅｉｎｓｏｌｕｔｉｏｎＩ．Ａｍｏｎ ｇ ｔｈｅｍ ， ３４ｈａｖｅｂｅｅｎａｎｎｏｔａｔｅｄ．８ａｒ