天然药物化学实验讲义[].docVIP

天 然 药 物 化 学实 验 讲 义 天 然 药 物 化 学 实 验 讲 义 ……………………………………………………………………1 实验一 ………………………………………………2 实验………………………………………5 实验分离，检识…………………………6实验的提取、分离，检识…………………………9实验虎杖中大黄素提取分离检识……………………………13实验………………………………………17 实验一 一、目的要求 1．掌握薄层层析制板方法 2．了解吸附剂的活度测定法 二、实验原理 薄层板根据在制备过程中是否加入粘合剂分为粘合薄层和非粘合薄层二种，加入粘合剂的为硬板，不加粘合剂的多为软板亦有为硬板，如纤维素板。粘合剂常用的有羧甲基纤维素钠CMC-Na）或煅石膏G）。加羧甲基纤维素钠制备的板机械强度较好，但对一些需加热的腐蚀性显色剂不适用。加石膏制备的板性能相反，机械强度较差，但适合于使用需加热的腐蚀性显色剂。 对层析用吸附剂活度的测定，主要是利用吸附剂自身对某些偶氮染料吸附力的大小和在薄层板上展开距离来确定，故用测量比移值的方法来确定吸附剂的极性大小和强度级数. 三、实验材料 材料： 氧化铝层析用，中性70325目）、四氯化碳重蒸馏、偶氮苯Ajobenjene）、对甲氧基偶氮苯P-methoxyajobenjene）、苏丹黄sudan I benjen-azo-(- naphthot）、苏丹红SudanII tetra-ajobenjen-(--naphthot）、对氨基偶氮苯P-aminoajobenene）、硅胶G、羧甲基纤维素钠CMC-Na） 仪器： 天平、研钵、药匙、玻璃板烘箱、干燥器、毛细管四、实验内容 （一）薄层层析薄层板的制备 1．氧化铝薄层 取表面光滑，直径均一的玻璃棒一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在玻璃棒两端各包上橡皮胶，也可以套上塑料管或橡皮管，一般以0.25用于分析分离1mm（用于制备分离为宜。在一端已包好的橡皮胶上，再多包56层橡皮胶或一段橡皮管，作为涂铺时的固定边，以防止滑动时边缘不整齐。操作时，将氧化铝粉均匀地铺在玻璃板上，再用玻棒压在玻板上将吸附剂自一端推向另一端，推移时，不宜太快，也不应中途停顿，否则厚薄不均匀，影响层析效果。 2．硅胶G薄层 取硅胶G1份，置研钵中加水34份，研磨均匀，放置片刻，随即用药匙取一定量，分别倒在一块大玻璃板上（或倒入涂布器中，推动涂布），均匀涂布成0.250.50mm厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀。或取两块2.5mm厚度的玻璃长板，中间夹一至几块2mm厚的薄层板，将适量硅胶糊倒在中间，用药匙适当涂匀，另取一块边缘平整的玻璃片将硅胶糊刮平，推出薄层板，水平放置，待薄层发白近干，于烘箱中110℃烘干活化12小时，冷后贮于干燥器内备用。活化烘干温度、时间可依需要调整，一般鉴别水溶性化合物或一些极性大的化合物时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。 3．硅胶G羧甲基纤维素钠薄层 取羧甲基纤维素0.2g，溶于25ml蒸馏水中，加热搅拌使完全溶解，倒入研钵中加硅胶细粉一般300目的硅胶细粉约用68g，200目的则用1012g），研磨成糊，照硅胶G薄层涂布法制备薄层板。 二氧化铝、硅胶活度的测定 1．氧化铝活度的测定，一般可用45种偶氮染料以薄层层析法进行测定。 1）染料试剂的配制 取偶氮苯60 mg，对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氨基偶氮苯各40mg，分别溶于100ml重蒸馏的四氯化碳中。 2）实验方法 ①制板：按上述方法制备氧化铝薄层软板两块，大小约20×6cm。 ②点样：以铅笔尖或毛细管尖在薄层板一端23cm处，轻轻触及薄层再作起 始线标记，间隔lcm左右点上5个可以看清的小点，然后分别用毛 细管蘸取各种染料分别点在原点上，点样的斑点直径不得超过0.5cm。③展开：将点样的软板轻轻置于预先加入重蒸馏四氯化碳的层析槽中事先垫高 层析槽的下行端，勿使展开剂与薄层板接触，盖好槽盖放置半小时， 以进行饱和。半小时后，调换层析槽下支撑物，再垫高层析槽的上行端， 使薄层板与容器底部交角为1040℃之间，令展开剂流集于层析槽的 下行端，使与薄层板相接触以不淹没点样原点为度以进行展层，当展开剂展至薄层板全长的三分之二时，即可取出薄层板， 迅速量出前沿至原点的总长度和原点至各个色斑的长度，依以下公式计算各色点的比移值Rf） Rf= ④结果判断 根据测量结果计算结果Rf值，可以下表中查出相应活度级数，以判断该氧化铝的活性大小。 Ⅱ级 Ⅲ级 Ⅳ级 Ⅴ级 偶 氮 苯 0.59 0.74 0.85 0.95 对甲基偶氮苯