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细胞内双反应性药物递送的聚乙二醇

细胞内双反应性药物递送的聚乙二醇-聚(二硫氨基甲酸酯胺)嵌段共聚物的自组装胶束在酸性和还原反应中PEG-SSPCA胶束的不稳定特性作为一个例子,通过跟踪他们的大小的变化,研究酸或还原条件对PEG–ssbap胶束的影响。在室温下PEG–SSPCA胶束粉末溶于磷酸盐缓冲液(pH 7.4、pH 6.5、pH 5.5、20 mM)在DTT的存在或不存在(0.5mM)培养12小时。利用动态光散射测量大小。PEG-SSPCABAO包载药物和药物毒性测试装载DOX PEG–SSPCA胶束通过透析的方法进行。总之,阿霉素/盐酸盐(1mg)和三乙胺(10ul)溶解在DMSO(1ml)下搅拌过夜。PEG–SSPCA共聚物(10mg)也被溶解在DMSO(1ml)含三乙胺(10ul)。接下来,DOX和共聚物的溶液混合均匀,滴加去离子水(10ml)在圆底烧瓶搅拌下超过2小时。最终的步骤是去离子水(2*5L)经透析(10k MWCO)。残留的溶液通过膜过滤(0.45um,微孔)和最终在冷冻干燥后得到一个红色的粉末。载药量(DLC)和载药效率(DLE)分别用下列方程计算: DLC=(载带药物的量/药物载带胶束的量)*100%,DLE=(载带的药物的量/投加的药物总量)*100%。阿霉素在肿瘤细胞中的转运细胞内阿霉素载带胶束转运是在Z-Stack扫描模式用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察。简而言之,MCF-7或者SKOV-3种在玻璃的24孔板上密度控制在5*10^4,在37度和潮湿的5%CO2环境中孵化24小时。阿霉素载带PEG-SSBAP胶束在培养基中与细胞一起孵化。在1,4,24小时,利用干净的PBS缓冲液来清洗细胞,和干净的冷丙酮混合,用DAPI(1%)染色10分钟,在红细胞荧光成像在CLSMZ-Stack扫描模式可以看见。PEG-SSBAP胶束的抗癌效果通过HepG2,SKOV-3,MCF-7等癌细胞来对阿霉素载带PEG-SSBAP胶束的抗癌活性进行评估。细胞(个数10000)和胶束在96孔板上加入阿霉素的浓度在0.001-10ug/ml的培养基孵化24小时。根据操作说明利用阿尔玛蓝在检测细胞活性。未经处理的细胞(空白组)的存活率为100%。在相同的浓度下Dox单独的抗癌活性被设置为控制组。不同浓度(5-400ug/ml)的PEG–ssbap共聚物的毒性进行了检测,对细胞和PEG-SSBAP在培养基中共同孵化24小时后的细胞毒性。同时,对PEG–ssbap降解产物,即BAP和半胱胺,使用相同的方法测试毒性动物实验结论PEG–聚(氨基甲酸酯胺)嵌段共聚物的合成和表征在这项工作中,一系列新的PEG–聚(二硫氨基甲酸胺)(记为PEG–SSPCA)的嵌段共聚物通过2,2’-二硫乙二醇-双(对硝基苯基碳酸酯)(DTDE-PNC)和氨基封端的PEG的混合物(PEG-NH 2)和一个含叔胺伯二胺聚合反应,然后用过量二元胺终止反应。三个二元胺通过各种方式被应用于PEG-SSPCA胶束在聚(氨基甲酸酯)块。(图1)粗产物完全溶解在酸性水溶液(pH = 5)和通过超滤过程纯化,以消除低分子量的聚合物和非共轭的聚乙二醇。冷冻干燥后,得到作为盐酸盐的形式的三个共聚物。在DMF和水溶性测试中显示这些共聚物被溶解,测试浓度是1mg/ml. 核磁共振谱分析表明,PEG–SSPCA共聚物的化学成分均与预期一致(图S1),从光谱图上,δ7.3和δ8.3处的信号在对硝基苯残留的芳香质子,不能被检测到,表明PEG–SSPCA共聚物由伯胺端基和对硝基苯残留应在终止反应完全消耗。PEG–ssbap的红外分析在化学位移1700厘米cm-1和1530cm-1处有两个信号峰,是在聚合物中中氨基甲酸酯键的C=O键(图S2)。GPC测试表明这些PEG–SSPCA共聚物具有单模色谱峰(图S3)在体外实验形成的PEG–SSPCA纳米胶束对于药物的载带和释放探索PEG-SSPCA共聚物是否形成胶束,这些共聚物的溶液分别进行了动态光散射(DLS)和透射电子显微镜(SEM)。结果发现,这些共聚物自组装在纳米颗粒的范围内形成纳米级的胶束直径范围是141-214nm(表二)。这些PEG–SSPCA胶束的尺寸分布较窄(PDI 在 0.12–0.26)和单峰模式。此外,聚(氨基甲酸酯)块的结构对PEG–SSPCA颗粒粒径有一定影响。PEG–SSBAP胶束具有最小的尺寸,可能由于BAP(2,2-双(3-氨基-4-羟基苯基)丙烷)残渣的疏水性能。通过DLS分析和透射电镜下观察到的球形形貌。图2a显示了一个典型的PEG–SSBAP胶束的粒度分布的峰值。在PBS溶液中对不同浓度的PEG–SSPCA进行荧光光谱分析而且有一个芘探针提供这些共聚物的临界胶束浓度(CMC)。(图S5,表二),反映的PEG-SSPCA胶束疏水区。P

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