生物工程概复习提纲.doc

五大工程的定义、研究内容。 基因工程：在基因水平上操作并改变生物遗传特性的技术。即按照人们的需要，用类似工程设计的方法将不同来源的DNA分子在体外构建成重组DNA分子，然后导入受体细胞，并在受体细胞内复制、转录和表达。 细胞工程：以细胞为基本单位，在体外条件下进行培养、繁殖或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿发生改变，达到改良生物品种和创造新品种的目的，从而加速繁育动植物个体，或获得某种有用物质 蛋白质工程：以蛋白质结构和功能的研究为基础，运用遗传工程的方法，借助计算机信息处理技术，从改变和合成基因入手，定向改造天然蛋白质或设计全新的蛋白质，使之具有特定的结构、性质和功能，更好地为人类服务。 发酵工程：利用包括工程微生物在内的某些微生物或动、植物细胞及其特定功能，通过现代工程技术手段生产各种特定的有用物质；或者把微生物直接用于某些工业化生产。 酶工程：利用酶、细胞器或细胞所具有的特异催化功能，以及对酶的修饰改造，借助于生物反应器，生产人类所需产品。 基因工程研究的理论依据是什么？ 不同基因具有相同的物质基础； 基因是可以切割的； 基因是可以转移的； 多肽与基因之间存在对应关系； 遗传密码是通用的； 基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。 限制性核酸内切酶，一类识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核苷酸内切酶； DNA连接酶， DNA聚合酶，能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤的一类酶； 碱性磷酸酶， S1核酸酶， DNA印迹杂交（Southern Blotting）：根据毛细作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上。用标记的单链DNA或RNA探针，检测膜上的DNA片段。 RNA印迹技术（Northern blotting）：将RNA分子从电泳凝胶转移到硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤膜上，进行核酸杂交的一种实验方法。 原理：1、DNA是半保留复制的；2、温度可以控制DNA的变性和复性；3、Taq酶能够耐住高温反复使用。 步骤：变性、退火、延伸、多次循环后检测。 反转录法； 从细胞基因组中直接分离（基因组DNA文库，cDNA文库）； PCR从基因组中扩增出目的基因； 化学合成法。 -DNA连接酶优于DNA连接酶，提高酶浓度，延长反应时间。 基因工程表达系统的类型、各自特点。 以大肠杆菌为受体的基因工程制药的优势： 全基因组测序，共有4405个开放型阅读框架； 基因克隆表达系统成熟完善； 繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定； 被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物。 以大肠杆菌为受体的基因工程制药的劣势： 缺乏对真核生物蛋白质的复性功能； 缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统； 内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白； 细胞周质内含有种类繁多的内毒素。 以酵母菌为受体的基因工程制药的优势： 全基因组测序，基因表达调控机理比较清楚，遗传操作简便； 具有原核细菌无法比拟的真核蛋白翻译后加工系统； 大规模发酵历史悠久、技术成熟、工艺简单、成本低廉； 能将外源基因表达产物分泌至培养基中； 不含有特异性的病毒、不产内毒素，美国FDA认定为安全的基因工程受体系统； 酵母菌是最简单的真核模式生物。 以哺乳动物（ 无需昂贵的生产培养基； 生产力高，养殖简单，繁殖快，无需保证无菌的生产条件； 疫苗也在水果蔬菜中表达； 可大规模生产某种蛋白； 现代机械化农业能够有效地收割和加工大量的植物材料； 2、1、；2、；3、；4、；5、等；6、；7、8、都能无限增殖； 遗传物质发生变化； 细胞核体积发生增大，细胞发生畸形，核胞质比失调； 染色加深，胞质量异常； 细胞大小、形态不等，失去极性，排列紊乱，有细胞团。 ：，，。 单克隆抗体的制备方案、应用、发展趋势。 制备方案：1、材料准备；2、免疫操作；3、免疫脾细胞的收获；4、细胞融合；5、杂交瘤细胞筛选、鉴定与选择性培养；6、单克隆抗体的筛选、检测与鉴定；7、杂交瘤细胞的克隆化技术。 应用：细胞免疫学、免疫组织化学、微生物学、寄生虫学、肿瘤基础研究及临床诊治、生物治疗的导向武器 。 发展趋势：癌症方面，结肠癌、乳腺癌、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌；免疫性疾病方面，类风湿关节炎、强直性脊柱炎、银屑病、CROHN氏病；感染性疾病方面，菌血症、病毒性感染、儿童呼吸道融合病毒感染；器官移植及心血管疾病等的治疗方面迅速发展。 天然产物的定义、提高植物细胞次生代谢产物的途径。 天然产物的定义：提高细胞次生代谢产物的途径；2、3、 蛋白质工程的定义、原理、蛋白质工程的主要研究方法。 定义：原理：遗传密码的通用性，碱基配对原则，计算机信息处理技术，精确高效的定点突变技术 方法：蛋白质一级结构分析方法，氨基酸序列的测定；蛋白质构象研究方法，单晶体衍