正向基因学研究任意突变下小鼠的睡眠变化讲述.pptx

Forward-genetics analysis of sleep inrandomly mutagenized mice 1 正向基因学与反向基因学 传统的遗传学手段大致可以分为正向基因学和反向基因学两类。正向基因学从表型变化研究基因变化，而反向遗传学从基因变化研究表型变化。正向基因筛选是发现和表征前所未有的基因作用的黄金标准，但这一技术的一个关键的前题条件是这些性状可以被准确的评定。 2 睡眠的不同阶段 睡眠包括非快速动眼睡眠（NREM）和快速动眼睡眠（REM）两个阶段。通常人的梦境都发生在快速动眼睡眠阶段，当一个睡眠阶段结束后，就会迎来另一个睡眠阶段。在快速眼动阶段中，脑血流及代谢增加，引起心率加快，呼吸快而不规则，血压稍上升，体温升高，脑电波状况与清醒时相似，呈低电压快波。 3 “瞌睡虫”和“无梦者” Hiromasa Funato通过对8000多只小鼠进行了持续两天的睡眠规律记录，筛选出了两组特殊的小鼠，其中一组平均每天睡15小时以上，比正常情况多3.5小时左右；另一组小鼠的快速动眼睡眠时间减少了44%。后续的测序工作发现这两组小鼠的突变分别影响了Silk3和Nalcn基因。 4 “瞌睡虫”与Sik3基因 研究发现“瞌睡虫”的深度睡眠时间更长，但是对于咖啡因的反应并无异常，这说明“瞌睡虫”的促进觉醒的神经回路没有损伤（图见下页）。并且“瞌睡虫”的昼夜节律没有出现异常。这说明“瞌睡虫”的基因突变是通过增加深度睡眠来影响睡眠时间。 5 6 “瞌睡虫”与Sik3基因 Sik3是一种在全身表达的蛋白激酶，并且在脑部不止在已知的睡眠调节区域表达。后续的研究显示Sik3的一个单核苷酸突变可以使得Sik3基因的第13个蛋白编码区域丢失。 7 “瞌睡虫”与Sik3基因 在后续的实验中，Funato通过基因编辑技术（ZNF和CRISPR-Cas9）再现了“瞌睡虫”的表型（图见下页），进一步证明了新表型与Sik3基因的关系。 8 9 “无梦者”与Nalcn基因 与“瞌睡虫”不同，“无梦者”的昼夜节律表现型出现了改变，这一现象表明快速动眼睡眠受到昼夜节律的调控，而深度睡眠可能不受昼夜节律调控。由于快速眼动睡眠减少是人类认知功能减退的先兆之一，因此研究Nalcn基因的突变可能有助于治疗认知功能减退。 10 11 总结 通过正向基因筛选，发现了两组小鼠，分别具有睡眠时间增长、快速动眼睡眠阶段缩短的特点。这两种性状分别与Sik3、Nalcn基因有关。 通过CRISPR-Cas9和ZNF技术可以重现这两种突变，进一步证实了性状与基因的关系。 Sik3基因的突变不会影响小鼠的昼夜节律，而Nalcn的突变会影响昼夜节律。 12 参考文献 [1] Hiromasa Funato, Chika Miyoshi, Tomoyuki Fujiyama. Forward-genetics analysis of sleep inrandomly mutagenized mice.Nature,?2016,?539(7629). [2] Xu, M. et al. Basal forebrain circuit for sleep-wake control. Nat. Neurosci. 18, 1641–1647 (2015). [3] Saper, C. B., Scammell, T. E. Lu, J. Hypothalamic regulation of sleep and circadian rhythms. Nature 437, 1257–1263 (2005). [4] Mashiko, D. et al. Generation of mutant mice by pronuclear injection of circular plasmid expressing Cas9 and single guided RNA. Sci. Rep. 3, 3355 (2013). 13 14 15