蛋白质基础及检测技术分解.ppt

6.1 两性和等电点 蛋白质是由α-氨基酸通过肽键构成的高分子化合物，在蛋白质分子中存在着氨基和羧基，因此跟氨基酸相似，蛋白质也是两性物质。 等电点（isoe1ectric point，pI）：当蛋白质处于某一pH值的溶液中时，蛋白质分子上所带的正、负电荷相等，净电荷为零，蛋白质为兼性离子，此时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点（isoe1ectric point，pI）。等电点是蛋白质的特征常数，各种蛋白质有各自的等电点。 当蛋白质所处环境的pH大于pI（等电点）时，蛋白质分子带负电荷，pH小于pI时，蛋白质带正电荷，pH等于pI时，蛋白质所带净电荷为零，此时溶解度最小。 等电点检测方法：毛细管电泳法，等点聚焦电泳 6 蛋白质的理化性质 6.2 水解反应 蛋白质在酸、碱或酶的作用下发生水解反应，经过多肽，最后得到多种α-氨基酸。蛋白质水解时，应找准结构中键的“断裂点”，水解时肽键部分或全部断裂。 举例：Edman降解法测定蛋白质的氨基酸顺序，但该法一次只能降解几十个氨基酸残基，因此利用蛋白质的水解性质将蛋白质水解为一些小肽段，分别进行测序，最后进行拼接，获得蛋白质的氨基酸顺序。 6.3 胶体性质 有些蛋白质能够溶解在水里（例如鸡蛋白能溶解在水里）形成溶液。蛋白质的分子直径（1-100nm）达到了胶体微粒的大小，所以蛋白质具有胶体的性质。 在蛋白质表面有亲水基团，能与水发生水合作用，水分子受蛋白质极性基团的影响，定向排列在蛋白质分子的周围，形成水化层，将蛋白质颗粒分开，不致相聚而沉淀。 蛋白质在偏离等电点的溶液中，形成电荷层，同性电荷相斥，防止蛋白质颗粒相聚沉淀。 6.4 沉淀 原因：加入高浓度的中性盐、加入有机溶剂、加入重金属、加入生物碱或酸类、热变性。 盐析：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出，这种作用叫做盐析。 盐析出的蛋白质仍旧可以溶解在水中，而不影响原来蛋白质的性质，因此盐析是个可逆过程。利用这个性质，采用分段盐析方法可以分离提纯蛋白质． 不同的蛋白质其性质不同，耐受酸、碱、盐、重金属等的程度也不同 ，因此我们再对纯化工艺获得的蛋白质进行检测时应充分了解该蛋白质的相关性质及缓冲成分，保证检测任务顺利进行。 例如豆类中N的含量就远高于16%。 蛋白质是高分子有机化合物、结构复杂、种类繁多，但其水解的最终产物都是氨基酸。因此，把氨基酸称为蛋白质结构的基本单位。 构象是由于有机分子中单键的旋转所形成的。 75%的酒精用于消毒。这是因为，过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止其进入细菌体内，难以将细菌彻底杀死。若酒精浓度过低，虽可进入细菌，但不能将其体内的蛋白质凝固，同样也不能将细菌彻底杀死。 蛋白质基础及检测技术 1 蛋白质的基本概念 蛋白质（protein）是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。 蛋白质不仅在功能上与糖、脂肪不同，在元素组成上亦有差别。 根据蛋白质的元素分析表明，其元素组成依次为：碳(50-55%)、氧（19-24%）、氮（13-19%）、氢（6-7%）硫（0-4%）。有的还含有少量磷、铁、铜、锌、锰、钴、钼、碘等元素。一切蛋白质皆含有氮并且大多数蛋白质含氮量比较接近而恒定，一般为15—17％，平均为16％。这是蛋白质元素组成的一个重要特点，也是各种定氮法测定蛋白质含量的计算基础。即用定氮法测得的含氮量乘以6．25，即可算出样品中蛋白质的含量。但有的蛋白质中氮的含量有一定差别，应根据其氮的真实含量进行计算。 2 蛋白质的元素组成 3.1 氨基酸的结构 自然界的氨基酸超过300种，但是组成人体蛋白质的氨基酸有20种，可以看作是羧酸分子中α-碳原子上的氢原子被氨基取代而成的化合物，均属于α-氨基酸，即其氨基和羧基都连接在α-碳原子上。 氨基酸碳链表示： 其结构可用下列通式表示： 注：R代表不同的侧链基团，R不同代表不同的氨基酸 3 蛋白质结构的基本单位—氨基酸 各种氨基酸在结构上有下列共同特点： 组成蛋白质的氨基酸皆为α-氨基酸。 不同的α-氨基酸，其R侧链不同（氨基酸分类的依据）。它对蛋白质的空间结构和理化性质有重要的影响。 除R侧链为氢原子的甘氨酸外，其它氨基酸的α-碳原子所连接的四个原子或基团互不相同，该碳原子都是不对称碳原子。 20种氨基酸中的脯氨酸含有亚氨基，所以它是亚氨基酸。半胱氨酸在蛋白质分子中多数是以胱氨酸的形式存在。 3.