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鸟氨酸生物合成过程及其调 控方式 班级：生工1202 学号：1202140214 姓名：李晓雯 什么是鸟氨酸？ L-鸟氨酸结构式 鸟氨酸，分子式：H2NCH2CH2CH2CH(NH2)COOH，是一种碱性氨基酸。 不属于组成蛋白质的20种氨基酸。 作为尿素循环的一部分与尿素生成相关，氨基甲酰磷酸与鸟氨酸化合生成瓜氨酸和磷酸，瓜氨酸再转化为精氨酸，精氨酸再裂解为尿素和鸟氨酸，其在代谢上具有重要的作用。 在生物体内与精氨酸、谷氨酸、脯氨酸能相互转变，可与α-酮酸、乙醛酸进行氨基转移，在鸟氨酸脱羟酶作用下脱羧而生成丁二胺，丁二胺能进一步合成至多胺。 别名：L-鸟氨酸 两种途径 大肠杆菌及枯草杆菌的鸟氨酸生物合成途径 谷氨酸棒杆菌鸟氨酸生物合成途径 大肠杆菌及枯草杆菌的鸟氨酸生物合成途径及调节机制 ①N-乙酰谷氨酸合成酶 ② N-乙酰谷氨酸激酶 ③ N-乙酰谷氨酸-γ-半醛脱氢酶 ④ N-乙酰鸟氨酸转氨酶 ⑤ N-乙酰鸟氨酸酶 ⑥鸟氨酸氨甲酰基转移酶 ⑦精氨琥珀酸合成酶 ⑧精氨琥珀酸酶 谷氨酸棒杆菌鸟氨酸生物合成途径 N-乙酰谷氨酸合成酶; N-乙酰谷氨酸激酶; N-乙酰谷氨酸半醛脱氢酶; N-乙酰鸟氨酸转氨酶; N-乙酰谷氨酸-乙酰鸟氨酸乙酰基转移酶; N-鸟氨酸氨甲酰基转移酶; N-精氨琥珀酸合成酶; N-精氨琥珀酸裂解酶。 两种途径的区别 两种途径由谷氨酸合成N-乙酰谷氨酸, 由N-乙酰鸟氨酸生成鸟氨酸过程中： 大肠杆菌合成途径是由酰基转移酶N-乙酰谷氨酸合成酶、N-乙酰鸟氨酸酶分别催化。 谷氨酸棒杆菌合成途径由N-乙酰鸟氨酸生成鸟氨酸却是由N-乙酰谷氨酸-乙酰鸟氨酸乙酰基转移酶的共轭反应所催化。 鸟氨酸的调控 鸟氨酸是精氨酸生物合成的中间体代谢产物 用谷氨酸棒状菌的L-瓜氨酸或精氨酸营养缺陷型突变株可以生产鸟氨酸。 限制精氨酸的供应：关键酶：N-乙酰谷氨酸激酶，此酶受L-精氨酸的显著抑制，因此需要仔细控制精氨酸浓度在较低水平来使鸟氨酸高产。 采用连续补入精氨酸的方法。 发酵温度：25 ℃~ 40 ℃，不同微生物的最佳发酵温度不同，一般为37 ℃。 通气量：摇瓶试验可根据装液量或封口纱布的层数来估计通气量，不同菌种需要设计单因素试验确定装液量。 发酵pH：发酵pH 既要有利于菌体的生长，还要有利于鸟氨酸的积累。一般为pH6~ pH9。发酵过程中pH 不断降低，故需添加尿素或氨水调节发酵液的pH。不同菌种需设计单因素试验确定最适pH。 接种量:一般接种量为发酵液的5 %。30 mL 发酵液中可接斜面种子1 环。不同菌种需设计单因素试验确定最佳接种量。 发酵时间:发酵时间一般为1 d ～7 d。不同菌种需设计单因素试验确定最佳发酵时间。 精氨酸的添加量：鸟氨酸的生产菌一般为精氨酸缺陷型，不能合成精氨酸，只有加入适量精氨酸才能使菌体生长、使鸟氨酸的合成连续进行。不同菌种需设计单因素试验确定精氨酸的最佳添加量。 瓜氨酸、精氨酸、鸟氨酸 瓜氨酸 精氨酸 鸟氨酸 鸟氨酸循环 又叫尿素循环或Krebs-Henseleit循环 部位：肝细胞的线粒体和胞液 尿素合成的鸟氨酸循环学说 实验步骤： ①将大鼠的肝切片置于有氧条件下与铵盐混合，保温数小时后，铵盐含量减少，同时出现尿素。 ②若加入少量精氨酸、鸟氨酸或瓜氨酸，则尿素生成和产量都有所增加。 实验推论： ①从三种氨基酸的结构分析，鸟氨酸可能是瓜氨酸的前体，而瓜氨酸又是精氨酸的前体。 ②早有实验证明，肝脏中含有精氨酸酶，能催化精氨酸水解成鸟氨酸和尿素。 ③尿素生成量与铵盐减少量相当，三种氨基酸无量的明显变化，只是起催化作用。 实验结果：提出鸟氨酸循环合成尿素的学说，即尿素循环。 鸟氨酸循环的详细步骤 氨基甲酰磷酸的合成 瓜氨酸的合成 精氨酸代琥珀酸的生成 精氨酸的生成 尿素的生成 氨基甲酰磷酸的合成 在镁离子，ATP及N-乙酰谷氨酸（AGA）存在下，氨与CO2可在氨基甲酰磷酸合成酶I（CPS-I）的催化下，合成氨基甲酰磷酸。 此反应不可逆，消耗2分子ATP，并需AGA作为CPS-I的变构激活剂。 这步反应在肝线粒体内进行。 瓜氨酸的合成 在肝线粒体中还存在鸟氨酸氨基甲酰转移酶（OCT）能催化氨基甲酰磷酸与鸟氨酸缩合成瓜氨酸，此反应也不可逆。 精氨酸代琥珀酸的生成 瓜氨酸在线粒体合成以后，即被转移到胞液，在胞液中的精氨酸代琥珀酸合成酶的催化下，与天冬氨酸反应生成精氨酸代琥珀酸，此反应也需要ATP供能。 精氨酸的生成 在精氨酸代琥珀酸裂解酶的催化下，精氨酸代琥珀酸裂解成精氨酸和延胡索酸。 尿素的生