不同发育阶段草鱼肾脏蛋白质组差异的初步分析.PDFVIP

收稿日期: 2004-11-09;修订日期: 2006-01-20 基金项目:国家自然科学基金面上项目(资助 作者简介:张琼宇( 1982 ) ) ,男,汉族,湖南永州人,硕士 通讯作者:罗琛, E-mail: cluo@ hunnu. edu. cn 不同发育阶段草鱼肾脏蛋白质组差异的初步分析 张琼宇 谢锦云 赵如榕 罗 琛 (湖南师范大学鱼类发育生物学研究室,长沙 410081) 摘要:为了研究草鱼在不同发育阶段抗病能力差异的发育遗传学原因,以 1龄草鱼和 3龄草鱼的免疫器官肾脏为材 料研究其在蛋白质组水平的差异。提取 1龄草鱼和 3 龄草鱼肾脏的全蛋白,用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白 质的分离, 染色后,扫描成像, 经 PDQUST 软件分析, 分别检测到大约 900 个蛋白质点。这些蛋白质点主要分布在 pH41 5) 7之间, 其分子量大部分在 6612kDa以下。在 3 龄草鱼中检测到了 3个在 1 龄草鱼中没有的差异蛋白质点, 和20 个上调、下调的差异点。经MALDI-TOF质谱分析和数据库搜索, 证明在 3 龄草鱼肾脏中上调的差异点中有 4 个是与免疫或肾脏发育相关的蛋白质。这些初步的研究结果提示草鱼在不同发育阶段抗病能力的差异可能具有 其发育遗传学基础。 关键词: 草鱼; 蛋白质组;抗病性; 免疫系统;发育遗传学 中图分类号: S9651112 文献标识码: A 文章编号: 1000-3207( 2006) 04-0425-07 草鱼( Ctenopharyngodon idellus )是重要的淡水养 殖经济鱼类,但有多种病害严重威胁养殖草鱼的成 活率。众所周知,草鱼的病毒性、细菌性传染病主要 是发生在 1龄和 2龄阶段,而 3龄以上的草鱼很少 发病,具有很强的抗病能力 [ 1] 。这种现象说明草鱼 本身具有抗致病病毒和细菌的能力和机制, 但这种 抗病能力和机制不是一开始就具有的, 而是要到一 定的发育阶段, 即 2龄以后才可能完善和有效发挥 作用。从理论上分析, 草鱼这种与发育相关的抗病 机制的建立和完善可能在多个层次上与多种因素有 关:一是与分子水平上的发育遗传学因素有关,即草 鱼的一些与抗病相关的某些基因可能要在一定发育 阶段,被某些激活因子激活后才能表达,并且只有当 这些基因表达后草鱼的抗病机制才能建立和完善。 二是与组织、细胞水平上的组织结构,生理状态以及 获得性免疫特性等因素有关。但这些组织、细胞水 平的因素的产生一般又是某些特异性基因表达的结 果,因此, 发育遗传学的因素是不同发育阶段草鱼抗 病能力差异和草鱼抗病机制建立和完善的主要 因素。 对草鱼的各类病害的病原、病理和致病机理的 研究已经比较广泛和深入[ 1) 3]。最近,张义兵等又 在分子水平上对非特异性免疫机制进行了分析, 鉴 定了受紫外线灭活的草鱼出血病病毒诱导的干扰素 和抗病毒活性物质, 以及因干扰素调节而表达的一 批抗病毒相关基因 [ 4) 7] 。但从发育遗传学的角度探 讨草鱼自身抗病机制的建立和完善尚未见报道。蛋 白质组是指一种基因组所表达的全套蛋白质,或一 种生物、一种细胞(组织)所表达的全套蛋白。蛋白 质组学是以蛋白质组为研究对象的新的研究领域, 它旨在阐明生物体内全部蛋白质的表达类型、存在 方式(修饰方式)、结构、功能、及相互作用等[ 8) 9]。 由于蛋白质组学研究技术能在整体水平上对生物功 能进行研究,因此,用蛋白质组学的方法比较 1龄和 3龄草鱼,有可能在蛋白质水平上揭示造成不同发 育阶段草鱼抗病性差异的发育遗传学因素。 1 材料和方法 111 仪器设备及材料 固相 pH 梯度干胶条 ( pH4 ) 7L, 18cm) , IPG缓冲液( pH4 ) 7) , 覆盖液, 琼 脂糖, Pharmalyte3 ) 10,银染试剂,考马斯亮蓝 G-250 等均为 Phamacia 产品。二硫苏糖醇( DTT) , 碘乙酰 第 30卷 第 4 期 水 生 生 物 学 报 Vol. 30, No . 4 2 0 0 6 年 7 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA July, 2 0 0 6 胺,硫脲 ( Thiourea) , PMSF, 胰蛋白酶, A-cyano-4-hy- droxycinnamic acid,TFA 等均为 Sigma 公司产品。丙 烯酰胺, 甲叉双丙烯酰胺, 尿素, 甘氨酸, Tris, CHAPS, SDS,牛血清白蛋白( BSA)为 Amresco 公司产 品。低分子量标准蛋白质购自上海伯奥生物制品公 司。乙腈及其他试剂均为国产分析纯, 所有溶液均 用双蒸水配制。 IPGphor等电聚焦仪( Phamacia 公司) , Pr